【摘 要】
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目的探讨葛根素对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制。方法取对数生长期的MC3T3-E1细胞,加入不同浓度葛根素作用不同时间,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;
【机 构】
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南京中医药大学医学与生命科学学院; 南京中医药大学第一附属医院;
【基金项目】
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江苏省自然科学基金面上项目(BK20131417);江苏高校优势学科建设工程资助项目(中西医结合)
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目的探讨葛根素对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制。方法取对数生长期的MC3T3-E1细胞,加入不同浓度葛根素作用不同时间,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;结果显示,葛根素浓度为0.1μmol/L、作用时间为48 h时细胞增殖能力最强(以下实验采用葛根素浓度为0.1μmol/L、作用时间为48 h)。将MC3T3-E1细胞随机分为空白对照组、葛根素组和雌激素组,分别加入α-MEM完全培养基、0.1μmol/L葛根素和0.01μmol/L雌激素。作用48 h,电镜下观察细胞自噬情况,Western blotting法检测磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(p-AMPK)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3Ⅰ表达。观察干扰AMPK对葛根素作用后MC3T3-E1细胞自噬及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达的影响。结果空白对照组细胞器、细胞核和染色体形态正常;葛根素组和雌激素组细胞质内可见较多环状结构物质,该物质具有自噬体特异性的双层膜结构。葛根素组、雌激素组p-AMPK及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显高于空白对照组,雌激素组均明显高于葛根素组(P均<0.01)。干扰AMPK表达可减轻葛根素介导的MC3T3-E1细胞自噬程度,并降低细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达(P均<0.01)。结论葛根素可增强MC3T3-E1细胞增殖能力;激活AMPK/LC3信号通路介导的自噬水平是其可能的机制之一。
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