【摘 要】
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非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致死性传染病,对养猪业危害巨大。为了提供有效的抗原蛋白用于ASFV的临床诊断及免疫预防研究,本试验将ASFV SY18株A151R蛋白的基因序
【基金项目】
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洛阳市重大科技专项:非洲猪瘟综合防控关键技术研究;万人计划青年拔尖人才
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非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致死性传染病,对养猪业危害巨大。为了提供有效的抗原蛋白用于ASFV的临床诊断及免疫预防研究,本试验将ASFV SY18株A151R蛋白的基因序列进行密码子优化,并克隆至pET28a载体,双酶切验证得到大小分别为450 bp和5300 bp左右的片段,验证重组载体正确。重组载体pET28a-A151R转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,添加pG-Tf2载体以提供伴侣分子帮助目的蛋白折叠,并通过摇瓶发酵考察目的蛋白的表达。SDS-PAGE与Image-Pro Plus软件分析结果表明,A151R蛋白可实现65.4%的可溶性表达,蛋白大小为17 kDa左右,利用亲和层系纯化所得目的蛋白纯度达到97.4%。Western blot结果显示,A151R蛋白可被ASFV阳性血清识别,表明其反应性良好。本研究首次实现A151R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,为ASFV诊断及其疫苗的研究提供了较好的候选抗原蛋白。
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