【摘 要】
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目的 观察微小RNA (microRNA,miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1,NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMGs)钙化的作用及机制.方法 大鼠体外原代培养VSMCs,并分为正常组和高磷组.采用ELISA法测定各组VSMCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;采用茜素红染色及钙含量检测各组VSMCs的钙化;采用实时荧光定量PCR测定各组VSMCs miR-30b
【机 构】
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050011石家庄,河北医科大学第四医院肾内科
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目的 观察微小RNA (microRNA,miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1,NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMGs)钙化的作用及机制.方法 大鼠体外原代培养VSMCs,并分为正常组和高磷组.采用ELISA法测定各组VSMCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;采用茜素红染色及钙含量检测各组VSMCs的钙化;采用实时荧光定量PCR测定各组VSMCs miR-30b及NFATc1和Runx2表达,Western blot检测NFATc1、Runx2的蛋白表达.为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用,给予miR-30b的类似物mimic-30b和抑制物inhibitor-30b,检测VSMCs的钙化及NFATc1、Runx2的表达和ALP的活性变化.结果 与正常组比较,高磷诱导的VSMCs钙化增加(t=--13.324,P＜0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.621、-4.684,P值分别为0.010、0.009);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.340、-3.860,P值分别为0.005、0.018);ALP活性升高(t=-12.636,P＜0.001);miR-30b的表达降低(t=-3.822,P=0.019).转染inhibitor-30b后,inhibi-tor-30b组较未转染组、inhibitor-NC组的钙含量升高(F=606.554,P＜0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为36.427、22.512,P值分别为＜0.001、0.002);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为44.225、42.832,P值分别为＜0.001、＜0.001);ALP活性升高(F=347.356,P＜0.001).转染mim-ic-30b后,钙化降低(F=93.341,P＜0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为69.841、6.090,P值分别为＜0.001、0.036);Runx2的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为44.780、841.081,P值分别为0.005、＜0.001);ALP活性降低(F=197.829,P＜0.001).结论 miRNA-30b可抑制VSMCs钙化,可能是通过下调NFATc1,进而下调Runx2表达,从而使VSMCs表型转化减少实现的.
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