【摘 要】
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目的 探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白(hIL-1Ra)和白细胞介素-10(hIL-10)联合基因转染在人骨关节炎(OA)关节软骨细胞中稳定表达的可行性.方法 构建
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科,健康科学研究所
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目的 探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白(hIL-1Ra)和白细胞介素-10(hIL-10)联合基因转染在人骨关节炎(OA)关节软骨细胞中稳定表达的可行性.方法 构建含目的 基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和FLXRN-IL-10,经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内目的 基因的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-1Ra和hIL-10蛋白表达量的水平.结果 酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10真核表达载体.稳定转染软骨细胞后,RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10mRNA片段.ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的hIL-1Ra和hIL-10表达,单个基因转染组中分别为(60.47±15.13)和(19.73±4.10)ng/L;联合基因转染组为(67.15±11.47)和(16.76±9.96)ng/L.未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL-1Ra和hIL-10表达,基因转染组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 逆转录病毒载体PLXRN介导的hIL-1Ra和hIL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达,为将表达hIL-1Ra和hIL-10目的 基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据.
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