【摘 要】
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目的构建稳定表达恶性疟原虫(Pf)顶端膜抗原1(AMA1)的重组改良安卡拉痘苗病毒(MVA),对其诱导小鼠免疫应答的特性进行分析. 方法构建包含Pf AMA1编码基因的重组载体pⅢdHR.ssp/E,转染MVA感染的BHK21细胞,经同源重组插入MVA基因组的deletionⅢ位点,利用宿主范围基因k1l在RK13细胞中对rMVA进行瞬时筛选,用获得的rMVA/E(K1L)感染BHK21并进行传代
【机 构】
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710032,西安,第四军医大学病原生物学教研室,
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目的构建稳定表达恶性疟原虫(Pf)顶端膜抗原1(AMA1)的重组改良安卡拉痘苗病毒(MVA),对其诱导小鼠免疫应答的特性进行分析. 方法构建包含Pf AMA1编码基因的重组载体pⅢdHR.ssp/E,转染MVA感染的BHK21细胞,经同源重组插入MVA基因组的deletionⅢ位点,利用宿主范围基因k1l在RK13细胞中对rMVA进行瞬时筛选,用获得的rMVA/E(K1L)感染BHK21并进行传代,经内部同源重组去除k1l后获得rMVA/E.采用PCR、IFA和Western blot对rMVA/E的基因组序列和重组抗原的表达情况进行鉴定.用不同剂量的rMVA/E经腹腔接种免疫BALB/c小鼠,ELISA检测特异性抗体应答的水平并分析IgG亚类(IgG1和IgG2a),取脾细胞用重组抗原在体外进行刺激增殖. 结果获得了可稳定表达Pf AMA1的重组MVA,经3次腹腔接种不同剂量(107～108 TCID50)后的rMVA/E诱导BALB/c小鼠产生了水平相当(P＞0.1)的抗AMA1抗体,其IgG亚类以IgG2a为主,各免疫组脾细胞在体外对AMA1抗原的再刺激均产生了明显的回忆应答. 结论成功构建了携带Pf ama1基因的重组MVA.rMVA/E可诱导小鼠产生AMA1特异的免疫应答.
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