【摘 要】
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目的 评价重组腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因(recombinant adenoassociated virus-mediated green fluorescence protein,rAAV-GFP)对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(
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目的 评价重组腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因(recombinant adenoassociated virus-mediated green fluorescence protein,rAAV-GFP)对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGCs)的转染效率和安全性.方法 取出生24 h内的SD乳鼠的视网膜神经上皮层,行视网膜神经细胞的体外混合培养;培养2 d后,按转染倍数(multiple on infection,MOI)为10、102、103、104、105对细胞进行转染;5 d后行流式细胞仪检测细胞表达绿荧光的比率,并应用PE-Thy1.1抗体标记RGCs,评价不同MOI的rAAV-GFP对RGCs的转染效率.应用MTT比色方法检测各组细胞的生长活性.结果 MOI为10、102、103、104、105时,对混合培养的全体细胞的转染效率分别为6.4%、15.6%、20.2%、45.1%和65.8%,其中对RGCs的转染效率分别为11.7%、22.5%、27.7%、52.0%和75.3%;rAAV-GFP转染RGCs后,细胞生长状态正常;MTT比色结果显示,各转染细胞和未转染细胞的光吸收值无显著性差异(P＞0.05).结论 rAAV作为体外培养的SD乳鼠RGCs转染的载体是安全可行的,且对细胞生长无明显影响.
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