小鼠肝脏羧酸酯酶的cDNA克隆、表达及应用

来源 :长春理工大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:hcjw248
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从小鼠肝脏中克隆羧酸酯酶(CES)基因家族成员Ces1f的cDNA,在大肠杆菌中表达,并验证重组酶对农药的作用。采用RT-PCR克隆Ces1f cDNA,与pUCm-T载体连接测序后,亚克隆至表达载体pET-32a,构建重组表达质粒pET-32a-Ces1f,转化到宿主菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定,采用Ni柱对表达产物进行纯化并测重组CES的酶比活,利用HPLC验证重组酶对不同农药的作用。结果显示:成功获得纯化的77kDa的重组CES蛋白,其酶液的比活为55.37U/m
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