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[摘 要]通过正交试验，优选出参归饮口服液的提取工艺。本制剂组方合理，制备工艺简便可行，质量稳定可控。
[关键词]参归饮 正交试验 提取工艺
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0393-01
参归饮口服液为本公司自行研制的口服制剂，由人参、当归、白术、熟地、白芍、甘草组成，具有补气、益血、养阴的功效，对五脏气血亏损、潮热盗汗、怔仲心悸、遗精滑脱等具有较好疗效，适用于久病体弱、放化疗或手术后免疫力低下者。本工艺采用传统水煎法，结合醇沉工艺精制而成。
1 仪器及试剂
1.1 仪器 岛津UV-2501PC型紫外分光光度计，定制玻璃层析柱（Φ=1.0cm）。
1.2 試剂 甲醇（AR）、D101型大孔吸附树脂、乙醇（AR）、香草醛（AR）、冰醋酸（AR）、高氯酸（AR）、人参皂苷Rg1对照品（批号：110703中检所）。
1.3 药材 人参、当归、白术、熟地、白芍、甘草、蔗糖均购于金华市医药公司。
2 实验方法与结果
2.1 处方组成 人参6g、当归6g、白术6g、熟地黄3g、白芍3g、甘草2g。
2.2 水提工艺研究
2.2.1 正交试验设计 取1个处方量的药材，以总皂苷为指标，选用L9（34）正交试验表，对加水量、提取时间、提取次数进行考察，因素与水平，见表1。
2.2.2 样品制备 根据处方量称取药材，分别按表2所列相应条件提取制备提取液，浓缩至1ml含2g生药，备用。
2.2.3 总皂苷的含量测定
2.2.3.1 标准曲线制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加入甲醇制成每ml中含1mg的对照品溶液。精密量取对照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分置10ml具塞试管中，挥去溶剂，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水溶液中保温15分钟后，立即置冰水冷却5分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，放置10分钟，以试剂空白作参比，在波长550nm处测定吸收度。各浓度相应的吸收度经统计处理得到回归方程为：Y=118.7X+346.2，r=0.9998。
2.2.3.2 样品溶液制备及测定 精密量取药材水提浓缩液（2g生药/ml）2.0ml，置分液漏斗中，加入甲醇40ml，萃取两次，合并萃取液，置100ml容量瓶中，定容。精确吸取上清液10ml，置蒸发皿中，水浴挥干溶剂，残留物加水2ml溶解，作为上柱液。将上柱液缓缓加入树脂柱中，加水15ml冲洗，然后换80%乙醇洗脱，以1.0ml/min的洗脱速度收集25ml乙醇洗脱液，沸水浴上挥干乙醇，残留物用少量甲醇溶解，转入5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密取供试品溶液1.0ml，按2.2.3.1方法测定吸收度，代入标准曲线，计算浓度。
2.2.4 正交试验结果 测定正交试验每个样品的总皂苷浓度。
从表3分析，结果显示水提时间、水提次数、加水倍数三个因素间无主次之别，综合分析得出最佳实验方案为A2B2C3，即用8倍量水，提取3次，每次1.5小时。
2.2.5 验证试验 按A2B2C3工艺提取三次，得样品测定总皂苷含量分别为5.94mg/ml、6.03mg/ml、6.19mg/ml均大于正交试验各次测定结果。再将处方量放大至正交试验量的5倍、10倍、15倍，仍按照A2B2C3的工艺分别提取，测定总皂苷含量分别为5.88mg/ml、5.72mg/ml、5.83mg/ml，总皂苷含量基本一致，故拟定此工艺为参归饮较佳的提取工艺。
2.3 醇沉工艺优选 中药提取液醇沉过程中，60%乙醇可使淀粉、多糖、蛋白质发生沉淀，80%以上乙醇可使极性较大的苷类成分发生沉淀，为了除去杂质，减少活性成分的损失，分别考察了体积分数60%，70%，80%乙醇沉淀对总皂苷成分的影响。取2.2.5中放大15倍量验证试验得到的水提液，减压浓缩至相对密度1.10（60℃），平均分为3份，放置室温后，加入用95%乙醇配制至相应的乙醇体积分数，充分搅匀后，4℃冷藏24h，离心，分离上清液，减压回收乙醇，以醇沉液中总皂苷浓度为考察指标筛选最佳醇沉工艺。
结果显示，用体积分数60%，70%，80%乙醇沉淀总皂苷含量分别为4.84mg/ml、4.14mg/ml、2.62mg/ml，其转移率分别为83%、71%、45%，说明80%醇沉总皂苷有损失，60%比70%醇沉总皂苷损失量少，故采用60%醇沉工艺。
分别称取10倍处方量的药材，经3批工艺验证试验，总皂苷平均转移率为84.6%，与筛选实验结果相近，说明醇沉工艺稳定可行。
2.4 配液工艺考察 采用2.3醇沉工艺验证试验得到的用60%乙醇醇沉得到的醇沉液，平均分成4等分，加入30%的单糖浆，分别加水至足量（150ml），混匀，过滤，灌装，灭菌，结果样品溶液均澄清；并对灭菌后制剂中总皂苷含量进行检测，结果分别为4.86、4.74、4.79、4.64mg/ml。由结果可知总皂苷含量受温度影响不明显，该配液工艺可行。
2.5 参归饮口服液制备工艺验证 分三批，每批称取50个处方量的同批次药材，按所选工艺进行试验，制得口服液样品，分别考察了总皂苷含量及澄清度，均符合质量标准要求且工艺稳定，结果总皂苷含量分别为4.74、4.98、4.82mg/ml，口服液澄清。
2.6 结果 经上述研究，得到参归饮口服液制备工艺：按处方量的称取相应药材，适量水浸润后，加入8倍量水，加热煮沸提取3次，每次1.5h，合并水提液，减压浓缩至相对密度1.10（60℃），放冷后加入用95%乙醇配制至体积分数60%浓度的乙醇，充分搅匀，4℃冷藏24h，离心，分离上清液，减压回收乙醇，加入30%的单糖浆，再加水至足量，过滤，灌装，灭菌，即得。
3 讨 论
参归饮处方中人参、白术补中益气，当归、熟地补血养阴，白芍、甘草酸甘养阴、养血柔肝，诸药合用共奏补气、益血、养阴之功。对大病初愈、年老体弱、手术后恢复和放化疗后患者，具有气血双补、提高免疫的作用。
本处方中人参、当归、白术、白芍、甘草中都含有皂苷类有效成分，故本研究采用总皂苷作为工艺考察指标具有合理性。由于皂苷类成分基本都溶于水，故采用传统水煎法作为提取工艺，结合醇沉法在保留皂苷类成分的基础上去除杂质进行精制，使口服液制剂性状改善、体积减小、便于携带和服用。
参考文献
[1] 黄凯文，郭洁文，陈剑梅，陈友华，等.岗梅叶总皂苷的提取纯化工艺研究[J].今日药学，2011，21（7）：408-410.
[关键词]参归饮 正交试验 提取工艺
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0393-01
参归饮口服液为本公司自行研制的口服制剂，由人参、当归、白术、熟地、白芍、甘草组成，具有补气、益血、养阴的功效，对五脏气血亏损、潮热盗汗、怔仲心悸、遗精滑脱等具有较好疗效，适用于久病体弱、放化疗或手术后免疫力低下者。本工艺采用传统水煎法，结合醇沉工艺精制而成。
1 仪器及试剂
1.1 仪器 岛津UV-2501PC型紫外分光光度计，定制玻璃层析柱（Φ=1.0cm）。
1.2 試剂 甲醇（AR）、D101型大孔吸附树脂、乙醇（AR）、香草醛（AR）、冰醋酸（AR）、高氯酸（AR）、人参皂苷Rg1对照品（批号：110703中检所）。
1.3 药材 人参、当归、白术、熟地、白芍、甘草、蔗糖均购于金华市医药公司。
2 实验方法与结果
2.1 处方组成 人参6g、当归6g、白术6g、熟地黄3g、白芍3g、甘草2g。
2.2 水提工艺研究
2.2.1 正交试验设计 取1个处方量的药材，以总皂苷为指标，选用L9（34）正交试验表，对加水量、提取时间、提取次数进行考察，因素与水平，见表1。
2.2.2 样品制备 根据处方量称取药材，分别按表2所列相应条件提取制备提取液，浓缩至1ml含2g生药，备用。
2.2.3 总皂苷的含量测定
2.2.3.1 标准曲线制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加入甲醇制成每ml中含1mg的对照品溶液。精密量取对照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分置10ml具塞试管中，挥去溶剂，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水溶液中保温15分钟后，立即置冰水冷却5分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，放置10分钟，以试剂空白作参比，在波长550nm处测定吸收度。各浓度相应的吸收度经统计处理得到回归方程为：Y=118.7X+346.2，r=0.9998。
2.2.3.2 样品溶液制备及测定 精密量取药材水提浓缩液（2g生药/ml）2.0ml，置分液漏斗中，加入甲醇40ml，萃取两次，合并萃取液，置100ml容量瓶中，定容。精确吸取上清液10ml，置蒸发皿中，水浴挥干溶剂，残留物加水2ml溶解，作为上柱液。将上柱液缓缓加入树脂柱中，加水15ml冲洗，然后换80%乙醇洗脱，以1.0ml/min的洗脱速度收集25ml乙醇洗脱液，沸水浴上挥干乙醇，残留物用少量甲醇溶解，转入5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密取供试品溶液1.0ml，按2.2.3.1方法测定吸收度，代入标准曲线，计算浓度。
2.2.4 正交试验结果 测定正交试验每个样品的总皂苷浓度。
从表3分析，结果显示水提时间、水提次数、加水倍数三个因素间无主次之别，综合分析得出最佳实验方案为A2B2C3，即用8倍量水，提取3次，每次1.5小时。
2.2.5 验证试验 按A2B2C3工艺提取三次，得样品测定总皂苷含量分别为5.94mg/ml、6.03mg/ml、6.19mg/ml均大于正交试验各次测定结果。再将处方量放大至正交试验量的5倍、10倍、15倍，仍按照A2B2C3的工艺分别提取，测定总皂苷含量分别为5.88mg/ml、5.72mg/ml、5.83mg/ml，总皂苷含量基本一致，故拟定此工艺为参归饮较佳的提取工艺。
2.3 醇沉工艺优选 中药提取液醇沉过程中，60%乙醇可使淀粉、多糖、蛋白质发生沉淀，80%以上乙醇可使极性较大的苷类成分发生沉淀，为了除去杂质，减少活性成分的损失，分别考察了体积分数60%，70%，80%乙醇沉淀对总皂苷成分的影响。取2.2.5中放大15倍量验证试验得到的水提液，减压浓缩至相对密度1.10（60℃），平均分为3份，放置室温后，加入用95%乙醇配制至相应的乙醇体积分数，充分搅匀后，4℃冷藏24h，离心，分离上清液，减压回收乙醇，以醇沉液中总皂苷浓度为考察指标筛选最佳醇沉工艺。
结果显示，用体积分数60%，70%，80%乙醇沉淀总皂苷含量分别为4.84mg/ml、4.14mg/ml、2.62mg/ml，其转移率分别为83%、71%、45%，说明80%醇沉总皂苷有损失，60%比70%醇沉总皂苷损失量少，故采用60%醇沉工艺。
分别称取10倍处方量的药材，经3批工艺验证试验，总皂苷平均转移率为84.6%，与筛选实验结果相近，说明醇沉工艺稳定可行。
2.4 配液工艺考察 采用2.3醇沉工艺验证试验得到的用60%乙醇醇沉得到的醇沉液，平均分成4等分，加入30%的单糖浆，分别加水至足量（150ml），混匀，过滤，灌装，灭菌，结果样品溶液均澄清；并对灭菌后制剂中总皂苷含量进行检测，结果分别为4.86、4.74、4.79、4.64mg/ml。由结果可知总皂苷含量受温度影响不明显，该配液工艺可行。
2.5 参归饮口服液制备工艺验证 分三批，每批称取50个处方量的同批次药材，按所选工艺进行试验，制得口服液样品，分别考察了总皂苷含量及澄清度，均符合质量标准要求且工艺稳定，结果总皂苷含量分别为4.74、4.98、4.82mg/ml，口服液澄清。
2.6 结果 经上述研究，得到参归饮口服液制备工艺：按处方量的称取相应药材，适量水浸润后，加入8倍量水，加热煮沸提取3次，每次1.5h，合并水提液，减压浓缩至相对密度1.10（60℃），放冷后加入用95%乙醇配制至体积分数60%浓度的乙醇，充分搅匀，4℃冷藏24h，离心，分离上清液，减压回收乙醇，加入30%的单糖浆，再加水至足量，过滤，灌装，灭菌，即得。
3 讨 论
参归饮处方中人参、白术补中益气，当归、熟地补血养阴，白芍、甘草酸甘养阴、养血柔肝，诸药合用共奏补气、益血、养阴之功。对大病初愈、年老体弱、手术后恢复和放化疗后患者，具有气血双补、提高免疫的作用。
本处方中人参、当归、白术、白芍、甘草中都含有皂苷类有效成分，故本研究采用总皂苷作为工艺考察指标具有合理性。由于皂苷类成分基本都溶于水，故采用传统水煎法作为提取工艺，结合醇沉法在保留皂苷类成分的基础上去除杂质进行精制，使口服液制剂性状改善、体积减小、便于携带和服用。
参考文献
[1] 黄凯文，郭洁文，陈剑梅，陈友华，等.岗梅叶总皂苷的提取纯化工艺研究[J].今日药学，2011，21（7）：408-410.