【摘 要】
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目的构建人羧基肽酶H(CPH)的原核表达系统,以获得其重组蛋白,并初步应用于人CPH自身抗体(CPH-Ab)的检测。方法采用PCR方法,从质粒pcDNAⅡ扩增出CPH基因片段,将其克隆到原核表
【机 构】
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中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所中南大学糖尿病中心
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目的构建人羧基肽酶H(CPH)的原核表达系统,以获得其重组蛋白,并初步应用于人CPH自身抗体(CPH-Ab)的检测。方法采用PCR方法,从质粒pcDNAⅡ扩增出CPH基因片段,将其克隆到原核表达载体pQE30后转化宿主菌E.coliM15,IPTG诱导CPH蛋白表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,Western-blot法检测表达蛋白的抗原性。用重组CPH蛋白作为包被抗原,初步建立检测CPH-Ab的ELISA方法。结果获得了CPH原核表达载体,CPH蛋白得到了表达。纯化的蛋白可被CPH-Ab阳性的1型糖尿病患者血清识别。与放射配体法相比较,以重组CPH蛋白作为包被抗原初步建立的ELISA方法,其灵敏性和特异性均升高,分别为93.3%和97.5%。结论重组CPH蛋白具有良好的抗原性,为糖尿病患者CPH-Ab的检测奠定了基础。
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