【摘 要】
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目的 建立快速检测牛肉源性成分的环介导等温扩增(LAMP)-核酸试纸条方法.方法 用直接加热煮沸方法提取鲜肉标本中的DNA;根据牛属特异性的16S基因序列片段设计引物和探针,优化扩增温度和扩增时间;结合核酸试纸条显色,将建立的快速检测方法与商品化的荧光定量PCR试剂盒比较.结果 LAMP检测方法的最佳反应条件为65℃30 min,5 min内通过扩增产物显色肉眼即可判断结果;具有高度特异性,只有牛肉标本出现特异性扩增;最低检测限为10 μg;与荧光PCR方法比较,两者检测结果一致.结论 环介导等温扩增-核
【机 构】
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湖州市疾病预防控制中心,浙江湖州313000
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目的 建立快速检测牛肉源性成分的环介导等温扩增(LAMP)-核酸试纸条方法.方法 用直接加热煮沸方法提取鲜肉标本中的DNA;根据牛属特异性的16S基因序列片段设计引物和探针,优化扩增温度和扩增时间;结合核酸试纸条显色,将建立的快速检测方法与商品化的荧光定量PCR试剂盒比较.结果 LAMP检测方法的最佳反应条件为65℃30 min,5 min内通过扩增产物显色肉眼即可判断结果;具有高度特异性,只有牛肉标本出现特异性扩增;最低检测限为10 μg;与荧光PCR方法比较,两者检测结果一致.结论 环介导等温扩增-核酸试纸条检测方法具有提取核酸方便、高效、敏感、检测时间短以及防污染等优点,非常适用在基层检验机构以及农贸市场、超市的现场快速检测.
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