论文部分内容阅读
目的观察重组抗原Ag85b和ESAT6-CFP10(EC)联合氢氧化铝佐剂(Al)和PolyIC(IC)佐剂诱导小鼠的免疫效果及对豚鼠结核的预防作用。方法将BALB/c小鼠随机分为6组:PBS组、Pro组(Ag85b+EC)、Al+IC组、Pro+Al组(Ag85b+EC+Al)、Pro+IC组(Ag85b+EC+IC)、Pro+Al+IC组(Ag85b+EC+Al+IC),经小鼠后肢内侧肌肉注射,共注射3次,间隔10 d。末次注射后2周,摘眼球采血,分离血清,采用间接ELISA法检测IgG抗体效价;同时处死小鼠,无菌取脾,分离淋巴细胞,采用ELISPOT法检测抗原特异性的IFNγ水平。将豚鼠随机分为3组:NS组、BCG组和Pro+Al+IC组,NS组和Pro+Al+IC组免疫3次,间隔10 d;BCG组仅免疫1次,于前两组第3次免疫时进行免疫。末次免疫30 d后经皮下注射结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)菌液,攻毒41 d后,处死豚鼠,解剖,检测肝、脾、肺的病变程度,并进行评分,同时分离脾脏Mtb,计算每只豚鼠的脾菌分离对数值。结果经Ag85b多肽和EC多肽刺激后,Pro+Al+IC组IFNγ斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)数均显著高于其他各组(P<0.000 1或<0.05),同组间经Ag85b多肽刺激后的SFC均高于经EC多肽刺激后的SFC。Pro+Al+IC组血清Ag85b特异性IgG抗体效价最高,与Pro+Al组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与Pro+IC组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Pro+Al+IC组血清EC特异性IgG抗体效价最高,与Pro+Al和Pro+IC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);同组间Ag85b特异性IgG抗体效价高于EC特异性IgG抗体效价。Pro+Al+IC组豚鼠脏器综合病变指数和脾菌分离对数值均显著高于BCG组(P<0.000 1),略低于NS组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论氢氧化铝佐剂和PolyIC佐剂联合使用可协同增强结核分枝杆菌抗原Ag85b和EC的细胞免疫应答及体液免疫应答;但Ag85b和EC配伍构成的重组亚单位疫苗对豚鼠预防性保护力较弱,不适合用作暴露前预防。