【摘 要】
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目的 探讨Shh信号通路中G蛋白偶联受体Smoothened(Smo)对成年大鼠神经干细胞(ANSCs)增殖、迁移的影响并阐明其作用机制.方法 培养ANSCs,分别添加Smo的激动剂Purmorphamine及其抑制剂Cyclopamine,细胞增殖-毒性实验(CCK8)检测其对ANSCs增殖的影响;细胞划痕实验检测其对ANSCs迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的细胞表面Patched蛋白(Ptch1)、G蛋白偶联受体Smo、转录因子
【机 构】
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南方医科大学基础医学院实验教学管理中心,广东 广州 510515;南方医科大学第三附属医院神经外科,广东 广州 510630;南方医科大学肿瘤研究所,广东 广州 510515
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目的 探讨Shh信号通路中G蛋白偶联受体Smoothened(Smo)对成年大鼠神经干细胞(ANSCs)增殖、迁移的影响并阐明其作用机制.方法 培养ANSCs,分别添加Smo的激动剂Purmorphamine及其抑制剂Cyclopamine,细胞增殖-毒性实验(CCK8)检测其对ANSCs增殖的影响;细胞划痕实验检测其对ANSCs迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的细胞表面Patched蛋白(Ptch1)、G蛋白偶联受体Smo、转录因子(Gli1)以及神经导向因子(Slit1)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达量的变化.结果 Smo激动剂PM对ANSCs的增殖有明显促进作用,48 h后PM组ANSCs的吸光度明显升高(P<0.01);PM可以促进ANSCs的迁移,48 h后的PM组ANSCs划痕面积显著减小(P<0.01);Smo抑制剂CPM对ANSCs的增殖和迁移均有显著的抑制作用;RT-PCR实验显示PM组细胞中的Ptch1、Smo、Gli1及Slit1、BDNF表达水平均明显增加(P<0.05).结论 调控Smo的活性可以促进或抑制成年神经干细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与调节BDNF和Slit1的表达有关.
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