【摘 要】
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目的应用生物信息学方法预测两种钩端螺旋体外膜蛋白的表位,结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析. 方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测LipL32和OmpL1的表位
【机 构】
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昆明,上海第二医科大学,中科院上海生命科学信息中心
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的应用生物信息学方法预测两种钩端螺旋体外膜蛋白的表位,结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析. 方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测LipL32和OmpL1的表位,应用PCR技术合成重组表位基因片段,克隆PCR产物构建重组质粒,测序验证.在BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白.纯化该融合蛋白,免疫BALB/c小鼠,显微镜凝集试验(MAT法)测定抗体效价. 结果在LipL32和OmpL1中各预测到2个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段.PCR合成的重组表位基因序列中没有出现移码和碱基置换.纯化后融合蛋白纯度＞90%.融合蛋白产生的抗体效价为75.79,融合头(运载蛋白)抗体效价为10.62. 结论重组表位具有一定免疫原性.为相关蛋白的表位重组和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础.
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