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摘要 [目的]建立蓝莓品种“粉红柠檬水”稳定高效的组培快繁体系。[方法]以“粉红柠檬水”带腋芽的茎段为材料，研究不同植物生长调节剂及生根基质对诱导、增殖、生根过程的影响。[结果]在改良WPM培养基上，添加玉米素ZT 2.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L可成功诱导出芽，将芽接种在添加0.3～1.0 mg/L ZT玉米素的培养基上增殖良好，增殖系数1.10～1.40；以水苔藓为扦插基质进行瓶外生根，生根成活率达85.00%。[结论]该研究可为蓝莓品种“粉红柠檬水”果树种植推广奠定基础。
关键词 粉红柠檬水；组织培养；快繁
中图分类号 S663 文献标识码
A 文章编号 0517-6611（2018）18-0086-02
Establishment of Tissue Culture Rapid Propagation System of Blueberry “Pink Lemonade”
ZHAO Zigang，ZHANG Hui，YU Caifeng et al （Modern Agricultural Park of Qingpu，Shanghai，Shanghai 201717）
Abstract [Objective]To establish a fast and efficient tissue culture system of blueberry variety “Pink Lemonade”.[Method]The effects of different plant growth regulators and rooting matrix on the process of induction，proliferation and rooting were studied.The stem segments with axillary buds was used as material.[Result]In the improved WPM medium，adding zeatin 2.0 mg/L and NAA 0.1 mg/L could successfully induce buds，and the improved WPM medium with the addition of 0.3-1.0 mg/L zeatin had a good proliferation and a proliferation coefficient of 1.10-1.40，and the rate of rooting was 85.00% with the water moss as the cuttage matrix.[Conclusion]The research could lay the foundation for the promotion of the “Pink Lemonade” planting.
Key words “Pink Lemonade”；Tissue culture；Rapid propagation
藍莓又名越橘，杜鹃花科越橘属，为多年生落叶或常绿果树，呈灌木状生长；果实为浆果，蓝色，近圆形，单果重0.5～2.5 g；果肉细腻，种子极小，甜酸适中，具有宜人的香气，可鲜食，也可加工成果汁饮料、果酒等饮品。蓝莓果实营养丰富，微量元素含量也很高，特别是富含钙、磷、镁、锌、铁、锗、铜，其抗氧化能力为所有果品、蔬菜之首，对防止人体细胞衰老，预防老年性疾病、心脏病、白内障、癌症、记忆力衰退等具有特殊功效，因而被国际粮农组织列为五大健康食品之一，被誉为“21世纪功能性保健水果”和“水果皇后”[1]，是近年世界发展最为迅速的集营养保健于一身的第三代果树新品种，风靡世界。
国内外对于蓝莓组培快繁的研究较多[2-3]，利用茎段、叶片作为外植体开展研究，已在多个类群中建立了组培再生体系。“粉红柠檬水”属兔眼蓝莓系列，由于成熟后果实呈鲜艳的红色，现已成为家庭盆栽种植、旅游观光种植的新宠，市场需求量较大，常规扦插育苗受时节限制，繁殖速度较慢，生长势差，果实品质较低，组培快繁具有速度快、商品性高、连年生产、成本较低等优势，因此建立适于该品种稳定高效的组培快繁体系意义重大。
1 材料与方法
1.1 材料
试验于2015年4月—2017年10月在上海青浦现代农业园区组培实验室和基地完成。品种为“粉红柠檬水”，以4—5月蓝莓新生枝条为材料，截取枝顶端10 cm长。
1.2 方法
1.2.1 外植体的选择与消毒。从田间选择无病健壮蓝莓母株，截取枝顶端10 cm长，用自来水冲洗30 min后，在超净台上进行消毒处理，用70%乙醇表面处理30 s，无菌水冲洗2次，然后用0.1%氯化汞处理8～10 min，最后用无菌水冲洗4次，将枝条剪切成至少带1个腋芽的茎段，接种于诱导培养基上[4-5]。接种后移至培养室内培养，光照2 000 lx，16 h/d，温度（25±1）℃，观察记录。
1.2.2 诱导产生不定芽。将蓝莓茎段接种于含不同浓度玉米素ZT（0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0、0.1 mg/L）的改良WPM培养基上，每个培养瓶接种3个茎段。采用完全区组设计，共设6种培养基配比方案（表1），每周观察记录分生组织的生长动态，30 d后统计萌发率，萌发率=萌发芽数/无菌外植体数×100%。
1.2.3 继代增殖。将诱导分化产生的健壮小苗进行分割，然后把分割开的小苗接种到增殖培养基上，继代组培苗株数为20株/瓶，每个处理10瓶，培养容器为200 mL玻璃瓶，增殖培养过60 d继代1次。增殖培养基采用含玉米素ZT（0、0.3、0.5、1.0、1.5 mg/L）的改良WPM培养基，采用完全区组设计，共设立5种培养基配比方案，记为B1～B5。60 d后统计增殖系数及苗粗壮度，增殖系数=增殖芽数/正常丛芽数。 1.2.4 组培苗驯化与瓶外生根。由于组培苗在无菌、高湿、强光等优越条件下生长形成，如直接将其移至大田，势必会出现生理功能上的紊乱而不能成活，因此，移栽前要将培养瓶从培养室中取出置于自然条件下，打开瓶盖，让幼苗进行透气锻炼，以提高抗逆性。24 h后，从瓶中取出，将其剪成2～3 cm的茎段，速蘸生根液（1 g/L IBA）后栽入不同混合基质（草炭∶珍珠岩为2∶1）及水苔藓中。用塑料薄膜盖好，保持湿度70%以上，初期适当遮光，后期逐渐通风，增加光照30 d后，可去除塑料薄膜，统计成活率，成活率=成活植株数/移栽植株数×100%。
2 结果与分析
2.1 初代诱导
由表2可知，A3～A6这4种培养基均能诱导蓝莓产生不定芽，即蓝莓腋芽萌发需要ZT的参与。当ZT超过2.0 mg/L时，萌发率并无显著提高，但芽畸变率提高，表现为木质化程度低，有黄化现象，这表明高浓度的ZT会影响茎尖的正常分化。该试验表明，蓝莓初代诱导过程中较适宜的植物生长调节剂为ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L。
2.2 茎段增殖
将诱导出的蓝莓苗转接到继代培养基上，60 d后调查芽的增殖情况。由表3可知，芽的增殖受ZT浓度的影响，较低浓度ZT有利于单芽生成（图1），高浓度ZT反而会提高芽的畸变率，表现为苗纤细瘦弱，木质化程度低，不利于持续的继代增殖，该试验认为增殖过程中最适的植物生长调节剂为ZT 0.3～1.0 mg/L。
2.3 组培苗驯化与生根
将组培茎段剪切成2～3 cm（至少带2个腋芽），速蘸生根液后栽入不同基质中，由表4可知，混合基质中的成活率只有68.33%，低于在水苔藓中的成活率（85.00%），因此，蓝莓组培苗瓶外生根时较理想的生根基质为水苔藓（图2）。
3 结论与讨论
该试验以“粉红柠檬水”的带腋芽茎段为外植体，接种在添加ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L的改良WPM培养基上进行初代诱导，将诱导的芽在添加0.3～1.0 mg/L ZT的改良WPM培养基上进行增殖，增殖系数达1.10～1.40，所诱导的蓝莓苗木质化程度较高，可直接用于瓶外扦插生根，最佳生根基质为水苔藓，生根成活率为85.00%。
已有的研究结果表明，蓝莓组织培养以MS、WPM为基本培养基效果较好[6-8]，该研究采取改良WPM培养基，添加ZT，不仅增殖系数高，而且增殖苗的木质化程度高，可以直接进行瓶外扦插生根，成活率高，成本低，可实现工厂化快速育苗。作为第三代果品，蓝莓有着广阔的市场前景，组培育苗加快了繁育速度，为该品种的果树种植推广奠定了基础。
参考文献
[1]
郝瑞.越桔及其栽培[J].中国果树，1987（1）：24-28.
[2] NICKERSON N L，HALL V.Callus formation in stem internode section of lowbush blueberry （Vaccinium angustifolium Ait.） cultured on a mediume containing plant grouth regulations[J].Hort Rev，1976，16：29-35.
[3] 陈慧都，郝瑞，关爱年，等.越桔工厂化育苗研究[J].中国农业科学，1990，23（3）：44-50.
[4] 张凤生，鹿娜，姜淼，等.蓝莓组织培养与快速繁育[J].黑龙江农业科学，2009（3）：3-5.
[5] 王俠礼，钟士传，郑亚琴，等.美国高灌蓝莓的引进及微体快繁技术研究[J].中国种业，2003（12）：40-41.
[6] 樊庆杰，张彩玲，韩超慧.北高灌蓝莓的离体快速繁殖研究[J].中国新技术新产品，2009（19）：231.
[7] 张力思，魏海蓉，艾呈祥，等.培养基组分对蓝莓组培增殖效率的影响[J].落叶果树，2006，38（4）：13-14.
[8] 陈镇.高丛蓝莓组培体系及种子萌发率的建模研究[D].金华：浙江师范大学，2011.
关键词 粉红柠檬水；组织培养；快繁
中图分类号 S663 文献标识码
A 文章编号 0517-6611（2018）18-0086-02
Establishment of Tissue Culture Rapid Propagation System of Blueberry “Pink Lemonade”
ZHAO Zigang，ZHANG Hui，YU Caifeng et al （Modern Agricultural Park of Qingpu，Shanghai，Shanghai 201717）
Abstract [Objective]To establish a fast and efficient tissue culture system of blueberry variety “Pink Lemonade”.[Method]The effects of different plant growth regulators and rooting matrix on the process of induction，proliferation and rooting were studied.The stem segments with axillary buds was used as material.[Result]In the improved WPM medium，adding zeatin 2.0 mg/L and NAA 0.1 mg/L could successfully induce buds，and the improved WPM medium with the addition of 0.3-1.0 mg/L zeatin had a good proliferation and a proliferation coefficient of 1.10-1.40，and the rate of rooting was 85.00% with the water moss as the cuttage matrix.[Conclusion]The research could lay the foundation for the promotion of the “Pink Lemonade” planting.
Key words “Pink Lemonade”；Tissue culture；Rapid propagation
藍莓又名越橘，杜鹃花科越橘属，为多年生落叶或常绿果树，呈灌木状生长；果实为浆果，蓝色，近圆形，单果重0.5～2.5 g；果肉细腻，种子极小，甜酸适中，具有宜人的香气，可鲜食，也可加工成果汁饮料、果酒等饮品。蓝莓果实营养丰富，微量元素含量也很高，特别是富含钙、磷、镁、锌、铁、锗、铜，其抗氧化能力为所有果品、蔬菜之首，对防止人体细胞衰老，预防老年性疾病、心脏病、白内障、癌症、记忆力衰退等具有特殊功效，因而被国际粮农组织列为五大健康食品之一，被誉为“21世纪功能性保健水果”和“水果皇后”[1]，是近年世界发展最为迅速的集营养保健于一身的第三代果树新品种，风靡世界。
国内外对于蓝莓组培快繁的研究较多[2-3]，利用茎段、叶片作为外植体开展研究，已在多个类群中建立了组培再生体系。“粉红柠檬水”属兔眼蓝莓系列，由于成熟后果实呈鲜艳的红色，现已成为家庭盆栽种植、旅游观光种植的新宠，市场需求量较大，常规扦插育苗受时节限制，繁殖速度较慢，生长势差，果实品质较低，组培快繁具有速度快、商品性高、连年生产、成本较低等优势，因此建立适于该品种稳定高效的组培快繁体系意义重大。
1 材料与方法
1.1 材料
试验于2015年4月—2017年10月在上海青浦现代农业园区组培实验室和基地完成。品种为“粉红柠檬水”，以4—5月蓝莓新生枝条为材料，截取枝顶端10 cm长。
1.2 方法
1.2.1 外植体的选择与消毒。从田间选择无病健壮蓝莓母株，截取枝顶端10 cm长，用自来水冲洗30 min后，在超净台上进行消毒处理，用70%乙醇表面处理30 s，无菌水冲洗2次，然后用0.1%氯化汞处理8～10 min，最后用无菌水冲洗4次，将枝条剪切成至少带1个腋芽的茎段，接种于诱导培养基上[4-5]。接种后移至培养室内培养，光照2 000 lx，16 h/d，温度（25±1）℃，观察记录。
1.2.2 诱导产生不定芽。将蓝莓茎段接种于含不同浓度玉米素ZT（0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0、0.1 mg/L）的改良WPM培养基上，每个培养瓶接种3个茎段。采用完全区组设计，共设6种培养基配比方案（表1），每周观察记录分生组织的生长动态，30 d后统计萌发率，萌发率=萌发芽数/无菌外植体数×100%。
1.2.3 继代增殖。将诱导分化产生的健壮小苗进行分割，然后把分割开的小苗接种到增殖培养基上，继代组培苗株数为20株/瓶，每个处理10瓶，培养容器为200 mL玻璃瓶，增殖培养过60 d继代1次。增殖培养基采用含玉米素ZT（0、0.3、0.5、1.0、1.5 mg/L）的改良WPM培养基，采用完全区组设计，共设立5种培养基配比方案，记为B1～B5。60 d后统计增殖系数及苗粗壮度，增殖系数=增殖芽数/正常丛芽数。 1.2.4 组培苗驯化与瓶外生根。由于组培苗在无菌、高湿、强光等优越条件下生长形成，如直接将其移至大田，势必会出现生理功能上的紊乱而不能成活，因此，移栽前要将培养瓶从培养室中取出置于自然条件下，打开瓶盖，让幼苗进行透气锻炼，以提高抗逆性。24 h后，从瓶中取出，将其剪成2～3 cm的茎段，速蘸生根液（1 g/L IBA）后栽入不同混合基质（草炭∶珍珠岩为2∶1）及水苔藓中。用塑料薄膜盖好，保持湿度70%以上，初期适当遮光，后期逐渐通风，增加光照30 d后，可去除塑料薄膜，统计成活率，成活率=成活植株数/移栽植株数×100%。
2 结果与分析
2.1 初代诱导
由表2可知，A3～A6这4种培养基均能诱导蓝莓产生不定芽，即蓝莓腋芽萌发需要ZT的参与。当ZT超过2.0 mg/L时，萌发率并无显著提高，但芽畸变率提高，表现为木质化程度低，有黄化现象，这表明高浓度的ZT会影响茎尖的正常分化。该试验表明，蓝莓初代诱导过程中较适宜的植物生长调节剂为ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L。
2.2 茎段增殖
将诱导出的蓝莓苗转接到继代培养基上，60 d后调查芽的增殖情况。由表3可知，芽的增殖受ZT浓度的影响，较低浓度ZT有利于单芽生成（图1），高浓度ZT反而会提高芽的畸变率，表现为苗纤细瘦弱，木质化程度低，不利于持续的继代增殖，该试验认为增殖过程中最适的植物生长调节剂为ZT 0.3～1.0 mg/L。
2.3 组培苗驯化与生根
将组培茎段剪切成2～3 cm（至少带2个腋芽），速蘸生根液后栽入不同基质中，由表4可知，混合基质中的成活率只有68.33%，低于在水苔藓中的成活率（85.00%），因此，蓝莓组培苗瓶外生根时较理想的生根基质为水苔藓（图2）。
3 结论与讨论
该试验以“粉红柠檬水”的带腋芽茎段为外植体，接种在添加ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L的改良WPM培养基上进行初代诱导，将诱导的芽在添加0.3～1.0 mg/L ZT的改良WPM培养基上进行增殖，增殖系数达1.10～1.40，所诱导的蓝莓苗木质化程度较高，可直接用于瓶外扦插生根，最佳生根基质为水苔藓，生根成活率为85.00%。
已有的研究结果表明，蓝莓组织培养以MS、WPM为基本培养基效果较好[6-8]，该研究采取改良WPM培养基，添加ZT，不仅增殖系数高，而且增殖苗的木质化程度高，可以直接进行瓶外扦插生根，成活率高，成本低，可实现工厂化快速育苗。作为第三代果品，蓝莓有着广阔的市场前景，组培育苗加快了繁育速度，为该品种的果树种植推广奠定了基础。
参考文献
[1]
郝瑞.越桔及其栽培[J].中国果树，1987（1）：24-28.
[2] NICKERSON N L，HALL V.Callus formation in stem internode section of lowbush blueberry （Vaccinium angustifolium Ait.） cultured on a mediume containing plant grouth regulations[J].Hort Rev，1976，16：29-35.
[3] 陈慧都，郝瑞，关爱年，等.越桔工厂化育苗研究[J].中国农业科学，1990，23（3）：44-50.
[4] 张凤生，鹿娜，姜淼，等.蓝莓组织培养与快速繁育[J].黑龙江农业科学，2009（3）：3-5.
[5] 王俠礼，钟士传，郑亚琴，等.美国高灌蓝莓的引进及微体快繁技术研究[J].中国种业，2003（12）：40-41.
[6] 樊庆杰，张彩玲，韩超慧.北高灌蓝莓的离体快速繁殖研究[J].中国新技术新产品，2009（19）：231.
[7] 张力思，魏海蓉，艾呈祥，等.培养基组分对蓝莓组培增殖效率的影响[J].落叶果树，2006，38（4）：13-14.
[8] 陈镇.高丛蓝莓组培体系及种子萌发率的建模研究[D].金华：浙江师范大学，2011.