【摘 要】
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目的:建立一种调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)体外高效扩增技术。方法:流式细胞仪分选健康人外周血CD4+CD25+CD127lowT细胞,CD3/CD28磁珠刺激联合高浓度白介素-2(int
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院内分泌科;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81070622,81370939,81670756,81530026);江苏省“333高层次人才培养工程”(2016-7)
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目的:建立一种调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)体外高效扩增技术。方法:流式细胞仪分选健康人外周血CD4+CD25+CD127lowT细胞,CD3/CD28磁珠刺激联合高浓度白介素-2(interleukin 2,IL-2)培养14 d。通过细胞计数评估Tregs体外扩增能力,采用流式细胞仪鉴定扩增Tregs的表型,采用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)实验检测Tregs的抑制功能。结果:CD4+CD25+CD127lowT细胞培养14 d后增殖(755.5±213.5)倍。流式细胞鉴定扩增后的细胞:CD4分子表达为(98.3±1.04)%,CD19分子表达为(0.039±0.021)%,CD8分子表达为(0.443±0.239)%,CD25分子表达为(97.6±1.35)%。FOXP3分子表达为(87.7±5.5)%,Helios分子表达为(73.3±2.9)%。MLR实验显示:Tregs以不同比例与外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)共培养,当Tregs∶PBMC为1∶1时,PBMC增殖抑制率最高,为(84.39±1.98)%。结论:成功建立一种体外高效扩增Tregs技术。扩增后细胞保留原有的细胞表型,并具备免疫抑制功能,为临床运用Tregs治疗自身免疫性疾病、抑制移植排斥反应提供了广阔的应用前景。
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