【摘 要】
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目的 探讨在乳腺癌细胞(MCF7)中瘦素诱导端粒酶反转录酶(hTERT)表达的分子机制.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定瘦素对沉默信号转导和转录激活因子3(
【机 构】
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300060,天津医科大学附属肿瘤医院中心实验室天津市肿瘤防治重点实验室乳腺癌防治教育部重点实验室
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目的 探讨在乳腺癌细胞(MCF7)中瘦素诱导端粒酶反转录酶(hTERT)表达的分子机制.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定瘦素对沉默信号转导和转录激活因子3( STAT3)基因后MCF7细胞hTERT mRNA表达水平的影响.采用Western印迹方法测定MCF7细胞经不同处理后hTERT蛋白的表达变化.采用染色质免疫共沉淀(CHIP)技术观察STAT3与hTERT启动子的结合情况.应用双荧光素酶分析,探讨瘦素及P-STAT3抑制剂(AG490)对hTERT 启动子转录活性的影响.结果 STAT3小干扰片段RNA( siRNA)转染细胞后,瘦素诱导的hTERT mRNA的表达减少.Western印迹结果示hTERT蛋白在瘦素处理组及AG490联合瘦素处理组的蛋白表达分别为3.109±0.051、1.025±0.031,加入P-STAT3抑制剂AG490后,瘦素诱导hTERT蛋白表达明显减少(P＜0.01).ChIP结果显示对照组与瘦素处理组mRNA分别为1、3.311±0.017,瘦素(160 ng/ml)作用MCF7细胞后,增加了STAT3与hTERT启动子之间的结合(P＜0.01).双荧光素酶分析结果示,经瘦素( 160 ng/ml)作用后,hTERT启动子活性的变化倍率为80.98±0.18,对照组为20.76±0.31,加入AG490后,hTERT启动子活性的变化倍率为18.65±0.32,瘦素诱导的hTERT启动子的活性明显下降.结论 在乳腺癌MCF7细胞中,瘦素/STAT3信号通路是上调hTERT表达的可能机制.
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