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目的
建立一种简便、快速的尿酸氧化酶四聚体提取纯化方法,以适应大规模生产需求。
方法首先通过基因工程的方法获得可以稳定发酵生产尿酸氧化酶的大肠埃希菌菌株,再通过一步萃取法从破碎菌体沉淀中获得尿酸氧化酶蛋白混合物。通过硫酸铵沉淀、离子交换和分子筛层析,最终获得纯化的活性尿酸氧化酶四聚体。
结果通过优化发酵及提取条件,每升发酵液可得到尿酸氧化酶四聚体蛋白约400 mg,其纯度>95%,比活>10 U/mg。
结论建立了一种新的尿酸氧化酶四聚体高效提取纯化方法。