【摘 要】
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目的 观察转录因子叉头框蛋白Ql（FOXQl）基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化（EMT）的逆转，探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制。方法构建针对FOXQl基因的短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，脂质体Lipofactamine2000介导FOXQl干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞；转染48h后采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot法检测FOXQl、上皮间质标
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,武汉430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,武汉430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,武汉430022,华中科技大学同
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目的 观察转录因子叉头框蛋白Ql（FOXQl）基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化（EMT）的逆转，探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制。方法构建针对FOXQl基因的短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，脂质体Lipofactamine2000介导FOXQl干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞；转染48h后采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot法检测FOXQl、上皮间质标志物E-钙黏蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏蛋白（N—Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达改变；细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力；噻唑蓝（M1Tr）比色法和吖啶橙／溴乙锭（AO／EB）荧光染色法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用。结果与转染NC—shRNA阴性对照组比较，转染FOXQl-shRNA48h后的T24细胞，FOXQl和间质标记基因N—Cadherin、Vimentin的mRNA或蛋白表达下降，而上皮标记基因E．cadherin的mRNA或蛋白表达显著增加；转染后的T24细胞形态向正常上皮细胞转化，体外迁移能力与侵袭力下降[（15．4±1．4）％比（76．5±1．1）％，P〈0．05]；细胞增殖明显抑制（57．8％比82．7％，P〈0．05），同时细胞凋亡率增加（37．6％比14．2％，P〈0．05）。结论靶向沉默FOXQl基因可以逆转肿瘤细胞的间质表型向正常上皮表型转化，抑制癌细胞迁移和侵袭，降低肿瘤转移潜能。
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