探讨拉坦前列素对人表皮黑素细胞增殖与黑素合成功能的影响及相关机制。
方法将拉坦前列素加入254培养基配制成10-5、10-6、10-7 mol/L浓度分别作用于体外培养的人表皮黑素细胞48 h,对照组用不加拉坦前列素的培养基处理。采用CCK8法检测黑素细胞增殖,多巴比色法检测酪氨酸酶活性,NaOH溶解法检测黑素合成水平,Masson-Fontana染色法观察细胞黑素颗粒数量及分布,Western印迹及荧光定量PCR分别检测黑素合成相关基因小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)及mRNA的表达。采用单因素方差分析法(ANOVA)和LSD-t检验法分别进行多组间比较及组间两两多重比较。
结果10-6、10-5 mol/L拉坦前列素组黑素细胞的增殖水平分别为1.064 ± 0.172、1.078 ± 0.080,均显著高于对照组(0.784 ± 0.015,t值分别为3.289、3.454,均P < 0.05);酪氨酸酶活性分别为0.510 ± 0.017、0.454 ± 0.009,亦显著高于对照组(0.355 ± 0.041,t值分别为6.139、3.939,P < 0.01或0.05);黑素含量亦显著增加(LSD-t=7.232、5.967,均P < 0.01)。而10-7 mol/L拉坦前列素组与对照组相比黑素细胞的增殖水平、酪氨酸酶活性、黑素含量差异均无统计学意义(均P > 0.05)。Masson-Fontana染色法显示,10-5、10-6、10-7 mol/L拉坦前列素组黑素细胞树突上的黑素颗粒均较对照组数量更多、颜色更深,且随拉坦前列素浓度升高,黑素颗粒的显色从淡棕色加深至黑褐色。MITF mRNA的表达随拉坦前列素浓度的升高而增加(高浓度组与低浓度组比较,均P < 0.01),且10-6、10-5 mol/L拉坦前列素组MITF蛋白表达量均显著高于对照组和10-7 mol/L拉坦前列素组(均P < 0.01)。10-6 mol/L拉坦前列素组TYR mRNA和蛋白的表达亦均显著高于对照组、10-7、10-5 mol/L拉坦前列素组(均P < 0.01)。10-6 mol/L拉坦前列素组TYRP1 mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组、10-7、10-5 mol/L拉坦前列素组(均P < 0.01)。
结论拉坦前列素可促进人表皮黑素细胞的增殖,并可能通过促进MITF、TYR、TYRP1 mRNA和蛋白的表达促进酪氨酸酶活性和黑素合成。