角膜干细胞增殖与分化表达实验研究

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目的了解角膜缘干细胞体外生长的增殖分化特性,检测上皮细胞生长因子对干细胞增殖的促进作用。方法采用DMEM和F12培养基进行兔角膜上皮细胞培养,用克隆形成率(colonyformingeficiency,CFE)、免疫组化染色和蛋白质免疫印迹等方法检测细胞的增殖力和分化表达状况。结果角膜缘干细胞(limbalstemcels,LC)在本培养条件下能够正常传代生长5代,CFE为(5.07±2.35)%,而角膜中央上皮细胞(centralcornealepithelialcels,CC)仅第1次传代生长,CFE为(1.12±0.86)%;LC冻存后复苏率为(0.43±0.22)%,CC为(0.16±0.07)%,差异有非常显著性(t=-5.54,P<0.01);上皮细胞生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)在质量浓度为5ng/ml和20ng/ml时对细胞的促增殖作用最强(t=-6.51,P<0.01)。干细胞在培养初期,细胞角质蛋白K3染色阴性,第2、3代时逐渐表达;而蛋白质免疫印迹检测早期(原代,第2代)为阳性,晚期(第4代)为阴性。结论角膜缘干细胞在体外培养的初期更有利于进行干细胞移?
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