【摘 要】
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为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV) 2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白.酵母共转化试验
【机 构】
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昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明650500中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究
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为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV) 2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白.酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合,激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质中.为定位RACK1与2B蛋白相互作用区域,本研究构建了RACK1截短表达重组质粒,并将其与pCAGGS-F1ag-2B共转染HEK293细胞,利用免疫共沉淀试验验证其相互作用区域.结果显示2B蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用,并且证明相互作用区域位于RACK1蛋白的N端.
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