【摘 要】
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利用PCR技术从pNL-43上扩增出截短的编码gp160蛋白的基因片断,克隆到酿酒酵母表达载体YEpFLAG-1上构建表达质粒YEp-gp160Δ12,电转化到酿酒酵母中,用缺色氨酸的SC培养基筛选
【机 构】
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厦门出入境检验检疫局,厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,武汉大学,
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利用PCR技术从pNL-43上扩增出截短的编码gp160蛋白的基因片断,克隆到酿酒酵母表达载体YEpFLAG-1上构建表达质粒YEp-gp160Δ12,电转化到酿酒酵母中,用缺色氨酸的SC培养基筛选出阳性克隆,重组子经YP培养基诱导后进行全菌蛋白的SDS-PAGE和Western Blotting分析,筛选出高表达菌株.纯化后的重组gp160Δ12(rgp160Δ12)蛋白经ELISA鉴定显示具有良好的生物活性.
The truncated gene fragment encoding gp160 protein was amplified from pNL-43 by PCR and cloned into the expression vector YEpFLAG-1 of Saccharomyces cerevisiae to construct the expression plasmid YEp-gp160Δ12. The fragment was electrotransformed into Saccharomyces cerevisiae, Of SC medium.The positive clones were screened by YP medium and SDS-PAGE and Western Blotting analysis of the whole bacterial proteins were induced by YP medium.The highly expressed strains were screened by ELISA.The purified recombinant gp160Δ12 (rgp160Δ12) protein was identified by ELISA Good biological activity.
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