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以根癌农杆菌双元载体ｐＣＡＭＢＬＡ１３００为基础，先后连接含有马铃薯蛋白酶抑制剂－Ⅱ基因（ＰⅡ）、苏云金杆菌毒蛋白基因（Ｂ．ｔ ｃｒｙＩ（Ａ））及雪花莲外源凝集素基因（ＧＮＡ）的完整表达片段，构建了抗多种稻田害虫的表达载体ｐＫＣ－３，将其导入根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４，可进一步用于水稻抗虫基因转化的研究。载体构建进程采用多次的大分子ＤＮＡ片段连接，总结出了一套适合大片段连接转化的可行策略。