【摘 要】
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目的采用弱酸洗脱提取人卵巢癌细胞膜表面的肿瘤抗原肽,用于负载脐血树突状细胞(DCs),观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法以淋巴细胞分离液分离脐血中的单个核细胞(C
【机 构】
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上海市第八人民医院妇产科,苏州大学附属二院妇产科
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目的采用弱酸洗脱提取人卵巢癌细胞膜表面的肿瘤抗原肽,用于负载脐血树突状细胞(DCs),观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法以淋巴细胞分离液分离脐血中的单个核细胞(CBMNC),将其中贴壁的细胞在细胞因子重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组白介素(rhIL)-4及重组肿瘤坏死因子(rhTNF-α)的配伍作用下诱导分化为DCs。室温下以pH为3.3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液处理人卵巢癌细胞,洗脱液经Oasis HLB小柱提取纯化后负载DCs。以3H-TdR掺入法测定负载抗原的DCs对混合T淋巴细胞的体外活化效应。结果贴壁的CBMNC在细胞因子2 000 U/mL rhGM-CSF、500 U/mL rhIL-4及100 U/mL rhTNF-α的配伍作用下体外诱导分化为具有典型形态和表型的DCs。人卵巢癌细胞弱酸洗脱肽负载的DCs与混合T淋巴细胞体外共培养后,T细胞增殖加快。结论CBMNC可以在GM-CSF、IL-4和TNF-α的作用下体外诱导分化为功能性DCs。pH为3.3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液洗脱法可得到卵巢癌细胞的弱酸洗脱肽,用其负载脐血DCs,体外可激活细胞毒T淋巴细胞。
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