真核表达载体pEGFP-N1-kin17的构建及其在Zmpste24-/-小鼠胚胎成纤维细胞内的表达

来源 :中国医药科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wang1hnsc

【摘要】

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目的：构建人kin17基因真核表达载体pEGFP-N1-kin17，将载体转染至野生型及Zmpste24基因缺失的小鼠胚胎成纤维上皮细胞，荧光显微镜观察kin17蛋白表达情况。方法用高保真DNA 聚合酶

【作者】

：

郑慧玲崔红晶余磊黄颖刘新光

【机构】

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广东省医学分子重点实验室,广东医学院衰老研究所,广东医学院生物化学与分子生物学研究所

【出处】

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中国医药科学

【发表日期】

：

2014年13期

【关键词】

：

kin17 GFP Zmpste24 小鼠胚胎成纤维细胞 kin17 GFP Zmpste24 Mouse embryonic fibroblasts

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目的：构建人kin17基因真核表达载体pEGFP-N1-kin17，将载体转染至野生型及Zmpste24基因缺失的小鼠胚胎成纤维上皮细胞，荧光显微镜观察kin17蛋白表达情况。方法用高保真DNA 聚合酶，从pCMV-kin17载体中扩增获取人kin17 cDNA编码序列，将其克隆至pEGFP-N1载体中，经酶切、连接、转化后，挑取阳性克隆进行菌液进行PCR、菌液质粒双酶切及测序鉴定；将成功构建的GFP-kin17表达载体转染Zmpste24-/- MEFs，荧光显微镜观察kin17蛋白的核定位情况。结果

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