根据狂犬病病毒SAD Bern株的全基因组序列(GenBank No.EF206720)与软件分析,将病毒基因组分为8个片段,构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,获得感染性克隆pcDNA-SAD。同时,基因合成时在G蛋白和L蛋白基因之间引入BsiWI和NheI酶切位点,以插入2个串联的狂犬病病毒G蛋白基因,获得携带3个G蛋白基因的重组质粒pcDNA-SAD-3G。利用脂质体转染法,将纯化的质粒pcDNA-SAD-3G及辅助质粒pcDNA-NP、pcDNA-P、pcDNA-L和pcDNA-G共转染BSR细胞,在BHK 21细胞上盲传,经RT-PCR、IFA鉴定重组病毒。结果表明,成功获得表达3个狂犬病病毒G蛋白的重组病毒RV-r3G,重组病毒RV-r3G的生长特性与亲本rSAD相比无明显差异,并且额外增加2个G基因,同样不影响重组病毒的生长性能,重组病毒RV-r3G在感染细胞中表达G蛋白的总量显著高于亲本株rSAD,RV-r3G体外嗜神经性比野生型高。本研究为进一步研发安全、有效的狂犬病疫苗候选毒株奠定了基础。