【摘 要】
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研究了ATP生物发光微生物快速检测试剂的反应动力学、反应最适温度、pH以及各种影响因素。在ATP生物发光反应中,测试系统中D-荧光素用量为40~50μg/mL时对反应已经足够;发光脉
【机 构】
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广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室,中国科学院南海海洋研究所,中国科学院研究生院
【基金项目】
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广东省科技攻关项目(No.2003B30902)
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研究了ATP生物发光微生物快速检测试剂的反应动力学、反应最适温度、pH以及各种影响因素。在ATP生物发光反应中,测试系统中D-荧光素用量为40~50μg/mL时对反应已经足够;发光脉冲计数CPM值随反应时间的延长不断降低,开始的1min内,其CPM值下降最快,然后下降速度不断减缓;反应的最适温度为24℃-25℃;而体系的最佳pH为7.2—7.4。配制好的发光试剂溶液置于4℃保存45h,可以保持86%的活力,在25℃时保温1h,活力下降较少,随时间的增加,活力逐渐下降,到6.5h时,仅剩53.5%的活力,而在33℃时,随着保温时间的延长,酶活力下降较快,保温1.5h,活力剩下59.1%,因此保存温度对发光试剂活力的影响非常大。各种化学物质如酸、碱、盐及表面活性剂都会抑制ATP发光反应,当NaCl浓度达到1.5g/L时,即可以抑制52.5%的发光,TritonX- 100及酸、碱对系统均有一定的影响,CTAB、SDS及TCA则严重抑制发光反应。
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