【摘 要】
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目的:探讨miRNA-3677-3p/FOXA3/Wnt/β-catenin通路介导HBx促进肝癌肿瘤干性和化疗抵抗的分子机制。方法:TargetScan预测miRNA-3677-3p的靶基因，培养HEK293T细胞后双荧光素酶实验分析miRNA-3677-3p与FOXA3的靶向关系。培养人肝癌细胞株Huh7和正常肝细胞株HL-7702,RT-qPCR检测细胞内miRNA-3677-3p及FOXA
【基金项目】
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长沙市自然科学基金项目（No:kq2014189）；
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目的:探讨miRNA-3677-3p/FOXA3/Wnt/β-catenin通路介导HBx促进肝癌肿瘤干性和化疗抵抗的分子机制。方法:TargetScan预测miRNA-3677-3p的靶基因，培养HEK293T细胞后双荧光素酶实验分析miRNA-3677-3p与FOXA3的靶向关系。培养人肝癌细胞株Huh7和正常肝细胞株HL-7702,RT-qPCR检测细胞内miRNA-3677-3p及FOXA3的表达情况，分别过表达或干扰miRNA-3677-3p、FOXA3在Huh7细胞中的表达后，通过CCK-8、Transwell和流式细胞仪分别检测Huh7细胞增殖活力、侵袭数目和CD133、EpCAM阳性表达率。培养耐药的Huh7/ADM细胞，分析miRNA-3677-3p与FOXA3对细胞化疗抵抗的影响，Western blot检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。上调HBx在Huh7细胞中的表达，分析Huh7细胞肿瘤干性和化疗抵抗，检测miRNA-3677-3p基因表达情况。最后分析下调miRNA-3677-3p表达对裸鼠成瘤的影响。结果:Huh7细胞中miRNA-3677-3p表达高于HL-7702细胞，FOXA3表达低于HL-7702细胞。下调miRNA-3677-3p表达降低了Huh7细胞增殖活力、侵袭数目和CD133、EpCAM的阳性表达，提高了细胞的化疗抵抗。miRNA-3677-3p靶向FOXA3,FOXA3表达上调降低了Huh7细胞增殖、侵袭数目和CD133、EpCAM的阳性表达，上调了细胞的化疗抵抗。上调miRNA-3677-3p靶向FOXA3激活了Wnt/β-catenin通路，并促进了Huh7细胞发展。过表达HBx后能够促进miRNA-3677-3p表达和Huh7细胞增殖与侵袭。下调miRNA-3677-3p表达在体内能抑制肿瘤发生。结论:miRNA-3677-3p/FOXA3/Wnt/β-catenin通路通过介导HBx调控肝癌肿瘤干性和化疗抵抗。
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