【摘 要】
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利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠
【机 构】
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扬州大学兽医学院/禽类预防医学教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31101826,31270171,31101833);国家“十二五”科技支撑计划项目(2012BAK17B10);教育部创新团队项目(IRT0978);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD);江苏省自然科学基金资助项目(BK2012265,BK2011430);扬州市农业科技攻关计划项目(YZ2011066)
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利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因高效表达。SDS-PAGE及Western blot结果表明:Hfq在大肠杆菌中成功表达,蛋白分子质量约为16.6ku,且主要存在于上清中,以可溶形式表达。进一步对表达产物进行Ni 2+亲和层析纯化,获得纯度较高的融合蛋白,为研究Hfq蛋白与sRNA的相互作用以及sRNA的调控机制提供基础。
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