人E2F2基因重组腺病毒的构建及在293细胞中的表达

来源 :中华耳科学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sophia_deng

【摘要】

：

目的构建含有人E2F2基因和绿色荧光蛋白基因（pEGFP）的腺病毒载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法根据已知的E2F2基因序列设计并合成相应的双链DNA,将其与酶切线性化的pDC3

【作者】

：

王琳杨仕明郭维维余力生

【机构】

：

解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,北京大学人民医院耳鼻咽喉科

【出处】

：

中华耳科学杂志

【发表日期】

：

2010年4期

【关键词】

：

E2F2基因重组腺病毒载体基因治疗 E2F2 gene Adenovirus vector Gene therapy

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目的构建含有人E2F2基因和绿色荧光蛋白基因（pEGFP）的腺病毒载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法根据已知的E2F2基因序列设计并合成相应的双链DNA,将其与酶切线性化的pDC315-EGFP载体片段连接,构建穿梭质粒pDC315-GFP-E2F2,并将其与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组产生重组腺病毒。对重组腺病毒进行扩增、纯化及滴度测定,用聚合酶链反应和测序方法验证穿梭质粒pDC315-GFP-E2F2穿梭质粒的构建;通过荧光显微镜和Westernb

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