【摘 要】
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目的 建立胃肠道间质瘤耐药细胞模型GIST882-R.方法 采用间歇浓度梯度倍增法体外诱导胃肠道间质瘤细胞株GIST882对Imatinib靶向治疗耐药,建立耐药细胞模型GIST882-R.光学显微镜观察亲本细胞GIST882-S和耐药细胞GIST882-R的细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期的变化;噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间及细胞半数致死浓度(IC50);基因测序检测
【机 构】
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山东省立医院普外科,250021,200032,上海,复旦大学附属中山医院普通外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普通外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院病理科,200032,上海
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目的 建立胃肠道间质瘤耐药细胞模型GIST882-R.方法 采用间歇浓度梯度倍增法体外诱导胃肠道间质瘤细胞株GIST882对Imatinib靶向治疗耐药,建立耐药细胞模型GIST882-R.光学显微镜观察亲本细胞GIST882-S和耐药细胞GIST882-R的细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期的变化;噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间及细胞半数致死浓度(IC50);基因测序检测细胞耐药前后突变位点有无变化.结果 (1)耐药细胞的细胞形态呈上皮样,核浆比增加;高倍镜下可见多核细胞、胞质内颗粒样物质增多.(2)耐药前后细胞周期分别为S期20.23%比17.38%,G0/G1期68.33%比72.25%,G2/M期11.44%比10.37%,变化差异有统计学意义(P＜0.01).(3)GIST882-R的倍增时间(47.10±2.01)h,长于亲本细胞株GIST882-S(39.56±1.18)h(P＜0.01);耐药细胞GIST882-R较GIST882-S对Imatinib的IC50显著增高,分别为(1.549±0.366)μmol和(0.136±0.025)μmol,耐药指数为11.39(P＜0.01).(4)对GIST882-R和GIST882-S进行Kit基因测序,两者均存在13外显子K642E突变,但在CIST882-R中未发现新的基因突变.结论 成功获得耐药细胞GIST882-R,CIST882-R对Imatinib靶向治疗的敏感性明显降低。
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