泌尿系草酸钙结石蛋白分析

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目的研究泌尿系草酸钙结石蛋白成分特点,为后续进一步探索蛋白质在结石形成中的作用机制奠定基础。方法随机收集临床结石样本20例,采用结石红外光谱分析仪分析结石组成成分;收集对应患者尿液进行尿液分析及细菌培养。采用RIPA蛋白裂解液溶解结石内蛋白成分,通过冷冻干燥浓缩提取结石内蛋白。采用细菌蛋白质提取试剂盒提取大肠杆菌蛋白。应用Bradford法测定蛋白浓度,再通过SDS-SPAGE电泳纯化蛋白,银染染色和考马斯亮蓝染色分别鉴定结石和大肠杆菌内蛋白分子量大小,进行蛋白比对。通过胶内酶解后抽提肽段,经液相色谱仪和质谱仪鉴定蛋白质成份,对质谱结果进行Gene Ontology等生物功能信息分析。结果⑴草酸钙结石平均蛋白浓度为0.57μg/μL。存在泌尿道感染时的草酸钙结石内蛋白含量相对较高(P<0.05)。大肠杆菌蛋白浓度为5.38μg/μL。⑵SDS-PAGE电泳结果显示草酸钙结石内蛋白有3至4条蛋白带,主要集中在25.0-35.0KDa和66.2-116.0KDa;大肠杆菌的蛋白条带主要集中在35.0KDa-116.0KDa。蛋白条带图谱提示草酸钙结石与大肠杆菌内蛋白质成份具有重叠性。⑶蛋白质谱分析显示草酸钙结石内有88种蛋白成分,以结合功能蛋白为主;其中包括S100A8、S100A9、纤维连接蛋白、角蛋白等炎症相关蛋白。结论泌尿系草酸钙结石内蛋白成分复杂,不仅与大肠杆菌蛋白成分存在交叉,而且有炎症相关蛋白,提示草酸钙结石形成与尿路感染存在关联,结石内炎症性蛋白成分在结石形成过程中的作用有待深入研究。
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