II型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

来源 :微生物学免疫学进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fdhwangwei
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目的原核表达、纯化 II 型登革病毒 NS1A 蛋白(NS1蛋白1~180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法 构建重组融合质粒 pET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌 BL21(DE3)中,IPTG 低温诱导表达。表达的融合蛋白经 Hitrap Talon crude 柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗 DENV2 NS1A 兔抗血清,用 WesternBlot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒 MV(S191)-DENV2 NS1 6Xhis 的识别和结合特性。结果 重组融合质粒 pET22b-p64K-L-DENV2 NS1A 经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量约 100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗 DENV2 NS1A 兔抗血清可识别重组病毒MV(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的 DENV2 NS1 蛋白。结论 原核表达并纯化了 DENV2 NS1A 蛋白,建立了基于NS1 蛋白的重组病毒 MV(S191)-DENV2 NS1 6XHis 的 WesternBlot 和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒 MV(S191)-DENV2 NS1 6XHis 的质检奠定了基础。
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