【摘 要】
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目的 观察苦参碱对肝癌干细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨苦参碱对肝癌干细胞的作用机制.方法 应用无血清肿瘤干细胞培养基,悬浮培养人肝癌细胞株SMMC-7721形成克隆,收集后裸鼠皮下接种并予以顺铂筛选,取耐药细胞继续悬浮培养获得干细胞克隆.采用不同浓度苦参碱体外作用72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法观察肝癌干细胞的增殖能力变化,荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Westem blot法检测侵袭转移
【机 构】
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315010宁波市第一医院肝胆胰外科,315010宁波市第一医院重点实验室,315010宁波市第一医院肝胆胰外科,315010宁波市第一医院重点实验室
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目的 观察苦参碱对肝癌干细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨苦参碱对肝癌干细胞的作用机制.方法 应用无血清肿瘤干细胞培养基,悬浮培养人肝癌细胞株SMMC-7721形成克隆,收集后裸鼠皮下接种并予以顺铂筛选,取耐药细胞继续悬浮培养获得干细胞克隆.采用不同浓度苦参碱体外作用72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法观察肝癌干细胞的增殖能力变化,荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Westem blot法检测侵袭转移相关基因细胞黏附调节基因(CAR)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、层粘连蛋白(Laminin)、纤连蛋白(Fibronectin)表达水平的变化.结果 在肿瘤干细胞培养基和顺铂的双重筛选下,SMMC-7721细胞能形成悬浮生长的干细胞克隆.5、50、100、200 mg/L苦参碱体外作用72 h后,可明显抑制肝癌干细胞的增殖,抑制率分别为(3.0±0.3)％、(26.9±0.5)％、(55.1±0.6)％、(77.4±0.8)％.荧光定量PCR结果显示,50 mg/L苦参碱可诱导肿瘤干细胞CAR、E-cadherin,Laminin、Fibronectin基因表达上调至未处理组的15.2、8.5、4.9和6.3倍,差异有统计学意义,与Western blot的结果一致.结论 一定浓度的苦参碱可明显抑制肝癌干细胞的体外增殖,并抑制其侵袭转移能力。
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