探讨不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及作用机制。
方法选取健康清洁级4日龄C57BL/6J幼鼠60只，应用随机数字表法随机分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)＋成纤维细胞生长因子2(FGF2)组、VEGF＋FGF2＋RC28-E1组、VEGF＋FGF2＋RC28-E2组、VEGF＋FGF2＋conbercept组、VEGF＋FGF2＋FGF trap组，每组10只。取各组视网膜组织块构建培养体系，加入用饥饿培养基配置的相应因子和药物刺激，正常对照组加饥饿培养基。将各组视网膜组织块进行植物凝集素(Isolectin B4)染色并拍照，计算各组单位血管长度下视网膜血管顶细胞分叉的数量。另选96只健康清洁级7日龄C57BL/6J幼鼠，应用随机数字表法随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变(OIR)模型对照组、OIR＋RC28-E1组、OIR＋RC28-E2组、OIR＋conbercept组和OIR＋FGF trap组，每组16只。正常对照组在常氧下饲养10 d，其余各组在高氧环境中饲养5 d后在常氧状态下再饲养5 d。各组取17日龄鼠视网膜进行Isolectin B4染色并拍照，用计算机软件分析视网膜相对无灌注区面积和新生血管像素。Western blot法检测OIR实验各组视网膜中VEGF和FGF2的蛋白水平。最后，在VEGF和FGF2刺激下的视网膜血管内皮细胞(RF/6A)中，检测给予RC28-E1、conbercept以及FGF trap处理后，细胞的MEK-细胞外调节蛋白激酶(Erk)、蛋白激酶C(PKC)以及蛋白激酶B(Akt)信号传导通路的活性变化。
结果视网膜组织块研究结果显示，VEGF＋FGF2＋RC28-E1组、VEGF＋FGF2＋RC28-E2组、VEGF＋FGF2＋conbercept组和VEGF＋FGF2＋FGF trap组中单位血管长度的顶细胞分叉数目均明显少于VEGF＋FGF2组，差异均有统计学意义(均P<0.001)，其中RC28-E1组与RC28-E2组的血管顶细胞分叉数量相似，差异无统计学意义(P＝0.15)，但均明显少于VEGF＋FGF2＋conbercept组和VEGF＋FGF2＋FGF trap组，差异均有统计学意义(均P<0.001)。OIR模型对照组无灌注区相对面积明显大于各药物干预组，差异均有统计学意义(均P<0.05)，OIR＋RC28-E1组与OIR＋RC28-E2组视网膜无灌注区相对面积的比较，差异无统计学意义(P＝0.17)，但二者明显小于OIR＋conbercept组和OIR＋FGF trap组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。各干预组新生血管的相对像素值明显低于OIR模型对照组，差异均有统计学意义(均P<0.001)，OIR＋RC28-E1组视网膜新生血管的相对像素值明显低于VEGF＋FGF2＋conbercept组和VEGF＋FGF2＋FGF trap组，差异均有统计学意义(均P<0.05)，但与OIR＋RC28-E2组相比，差异无统计学意义(P＝0.39)。Western blot结果显示，OIR小鼠视网膜中VEGF和FGF2的蛋白表达均较正常对照组显著上调，差异均有统计学意义(均P<0.001)，而RC28-E1和RC28-E2可使其降至正常水平。VEGF和FGF2可诱导RF/6A细胞中的MEK-Erk通路活性增强，而RC28-E1可显著抑制这一通路的过度激活。
结论RC28-E1和RC28-E2可在初生小鼠视网膜组织块中抑制血管生成，并减少OIR小鼠模型中视网膜的无灌注区，减轻新生血管生成。药理批次和中试批次的RC28-E在体内外模型中的效果相当，稳定性可靠，且优于临床同类药物conbercept和FGF trap。RC28-E1可能是通过抑制视网膜血管内皮细胞中MEK-Erk通路的过度激活而达到抑制病理性新生血管生成的效果的。