【摘 要】
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目的探讨转染靶向Her2/neu基因小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株药物敏感性的影响.方法实验分4组,未转染对照组、空载体组、非特异性siRNA组、Her2/neu siRNA组,实验重复5次.即用Her2/neu基因的特异性siRNA和非特异性siRNA通过阳离子脂质体LipofectAMINE 2000分别转染Calu-3细胞.
【机 构】
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110001,沈阳,中国医科大学第一附属医院胸外科,唐山工人医院外科,中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤生物学检测中心,,,
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目的探讨转染靶向Her2/neu基因小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株药物敏感性的影响.
方法实验分4组,未转染对照组、空载体组、非特异性siRNA组、Her2/neu siRNA组,实验重复5次.即用Her2/neu基因的特异性siRNA和非特异性siRNA通过阳离子脂质体LipofectAMINE 2000分别转染Calu-3细胞.采用流式细胞仪(FCM)检测各组Calu-3细胞Her2/neu蛋白和P糖蛋白(P-gp)的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测顺铂(DDP)对转染siRNA的癌细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素(AnnexinⅤ-FITC)凋亡试剂盒检测各组Calu-3细胞的凋亡水平.
结果Her2/neu siRNA组Calu-3细胞Her2/neu蛋白表达的阳性率为(25.04±1.56)%、P-gp蛋白表达阳性率为(4.24±1.01)%,而未转染对照组、空载体组、非特异性siRNA组Her2/neu蛋白表达的阳性率分别为(98.24±2.23)%、(95.67±1.98)%、(94.79±0.87)%;P-gp蛋白表达阳性率分别为(5.11±2.98)%、(6.98±2.47)%、(5.59±3.66)%.Her2/neu siRNA组Calu-3细胞Her2/neu蛋白表达受到明显抑制(F=112,P<0.05);而P-gp的表达水平各组差异无统计学意义(F=2.45,P >0.05);Her2/neu siRNA联合DDP作用的细胞抑制率达(67.1±2.3)%,而未转染对照组、空载体组及非特异性siRNA组联合DDP细胞抑制率分别为(48.1±3.5)%、(46.3±5.9)%及(50.2±2.9)%,3组间抑制率差异无统计学意义(F=8.68,P>0.05),3组分别与Her2/neu siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.01);FCM分析显示靶向Her2/neu基因特异性siRNA组Calu-3细胞的DDP诱导凋亡率为(35.6±3.4)%,明显高于未转染对照组的(8.8±0.5)%、空载体组的(9.6±1.7)%及非特异性siRNA组的(11.3±1.8)%,差异有统计学意义(F=10.68,P<0.01).
结论靶向Her2/neu基因siRNA能增强肺腺癌Calu-3细胞株对顺铂的敏感性.
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