【摘 要】
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目的体外实验观察一贯煎诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)定向分化肝细胞的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSC,第3代
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所,上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室,第二军医大学附属长海医院中医科,上海中医药大学附属曙光医院肝硬化科,
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目的体外实验观察一贯煎诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)定向分化肝细胞的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSC,第3代细胞采用流式细胞仪分析表面细胞因子、诱导分化为脂肪细胞鉴定其干细胞特征;采用肝细胞生长因子联合成纤维细胞生长因子和一贯煎含药血清2种诱导方案连续培养BMSC共21天,PCR检测细胞甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、白蛋白(albumin,Alb)、肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α)mRNA表达情况,细胞免疫荧光检测细胞AFP和细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)的表达,染色高碘酸-希夫反应法观察细胞糖原形成,Western blot法检测细胞CK18、Wnt 3α、α-catenin蛋白的表达情况。结果全骨髓贴壁法分离的BMSC高表达白细胞分化抗原(cluster of differentiation,CD)90、29、44,低表达CD34和CD11b,成脂诱导2周后油红O染色可见大量脂滴。一贯煎药物血清和细胞因子诱导均可提高BMSC表达Alb、AFP、HNF4αmRNA表达水平,促进CK18蛋白表达,诱导21天后可检测到AFP和CK18的表达,可见细胞合成糖原颗粒,观察到BMSC内Wnt 3α和β-catenin表达下调。结论一贯煎可诱导大鼠BMSC向肝细胞样细胞分化,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。
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