【摘 要】
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鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有严格的上皮细胞嗜性。由于缺乏可供IBV复制的传代细胞系,从而阻碍了从细胞水平研究其复制、致病等分子机制。掌握鸡肾上皮细胞等原代细胞的制
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31101832,31572524);江苏省科技支撑计划(BE2012369);扬州市自然科学基金项目(YZ2014029)
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鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有严格的上皮细胞嗜性。由于缺乏可供IBV复制的传代细胞系,从而阻碍了从细胞水平研究其复制、致病等分子机制。掌握鸡肾上皮细胞等原代细胞的制备、纯化及培养技术显得尤为关键。本项目组通过选择不同日龄的SPF鸡胚或雏鸡进行肾上皮细胞的制备,同时对消化酶、纯化方式及培养条件进行筛选优化,进一步采用具有EGFP标签的r H120-EGFP/5a重组病毒鉴定培养的鸡肾上皮细胞。结果表明:选择1日龄雏鸡,通过胶原酶Ⅰ消化制备的鸡肾上皮细胞的活力最佳;采用多次离心法能有效去除大量单细胞,从而达到纯化上皮细胞的目的;3%胎牛血清足够提供上皮细胞生长所需的营养,并能抑制CEF的生长。试验探索并优化了鸡肾上皮细胞制备及培养的条件,为禽源上皮细胞系的建立和IBV分子致病机制的研究奠定了基础。
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