【摘 要】
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Arnon法是叶绿素提取和测定最经典、最常用的方法,此法虽经多次改进,但仍存在着检测波长误差大、计算公式有误、提取速度慢、测定结果不够准确以及操作步骤繁琐等缺陷。该文
【机 构】
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曲阜师范大学生命科学学院; 南京晓庄学院生物化工与环境工程学院;
【基金项目】
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山东省自然科学基金(No.ZR2015DL009);曲阜师范大学精品实验项目(No.JP2014006,No.SJ201409);曲阜师范大学科技计划(No.XKJ201404)
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Arnon法是叶绿素提取和测定最经典、最常用的方法,此法虽经多次改进,但仍存在着检测波长误差大、计算公式有误、提取速度慢、测定结果不够准确以及操作步骤繁琐等缺陷。该文提出了二甲基亚砜（DMSO）高温提取、80%丙酮稀释的两步快速浸提法,使叶绿素提取和测定过程缩短至3小时以内。通过对提取温度、提取时间、稀释比例及吸收光谱等进行系统分析,筛选出了叶绿素的最佳提取条件和叶绿素含量的准确计算公式,并用多种类型的植物材料验证了改进后的提取方法,证明该方法具优越性和可靠性。具体测定方法是将植物材料切成1 mm宽的细丝或细段,取50-100 mg材料于10 m L具塞试管中;加入2 m L DMSO,使植物材料浸没其中,65°C高温避光提取至植物材料变白或透明;冷却后加入8 m L 80%丙酮,混匀,测定663.6和646.6 nm处的吸光度。用公式计算叶绿素浓度:Ca(mg·L-1)=12.27A663.6-2.52A646.6;Cb(mg·L-1)=20.10A646.6-4.92A663.6;CT(mg·L-1)=Ca+Cb=7.35A663.6+17.58A646.6。
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