探讨液泡膜ATP酶亚基的N末端结构域(a2NTD)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对巨噬细胞极化的协同作用,以及极化的巨噬细胞对胃癌细胞增殖能力的影响。
方法分离健康人外周血单个核细胞,诱导培养巨噬细胞后分为4组:对照组(RPMI1640),实验Ⅰ组(M-CSF 100 ng/ml),实验Ⅱ组(a2NTD 500 ng/ml)和实验Ⅲ组(a2NTD 500 ng/ml加M-CSF 100 ng/ml),刺激48 h后应用双重免疫荧光标记法检测巨噬细胞膜表面抗原的表达,用ELISA法检测细胞因子IL-10和IL-12的分泌情况,并用CCK-8法检测巨噬细胞对胃癌SGC-7901细胞增殖能力的影响。
结果巨噬细胞膜表面抗原CD68在4组巨噬细胞膜上均有表达(+),平均吸光度值(MD值)分别为:对照组0.092±0.005,实验Ⅰ组0.095±0.006,实验Ⅱ组0.094±0.005,实验Ⅲ组0.094±0.005 ,4组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。CD206在对照组弱表达(-),MD值为0.025±0.004;在实验Ⅰ组和实验Ⅱ组均有表达(+),MD值分别为0.191±0.012和0.197±0.136,在实验Ⅲ组超强表达(+++),MD值为0.285±0.011;除实验Ⅰ组与实验Ⅱ组比较差异无统计学意义(P> 0.05),其余各组两两比较,差异均有统计学意义(均P< 0.01)。实验Ⅰ组和实验Ⅱ组细胞分泌IL-10水平分别为(85.65±13.64) ng/L和(87.77±14.25)ng/L,均高于对照组[(71.67±7.56)ng/L,P < 0.01] ;分泌IL-12水平分别为(9.91±1.50)ng/L和(10.15±1.80)ng/L,均低于对照组[(16.87±1.10)ng/L,P< 0.01]。实验Ⅲ组分泌IL-10水平为(116.98±14.27)ng/L,高于其余各组(均P< 0.01);分泌IL-12水平为(5.31±0.88)ng/L,低于其余各组(均P< 0.01)。析因分析显示,在对IL-10和IL-12分泌量的影响上,a2NTD和M-CSF具有交互效应(均P <0.05)。各组巨噬细胞均能加快胃癌SGC-7901细胞的增殖,且实验Ⅲ组巨噬细胞对胃癌SGC-7901细胞增殖速度的促进作用明显强于其他各组(均P< 0.01)。
结论a2NTD与M-CSF在促使巨噬细胞极化及细胞因子分泌上具有协同作用,协同极化的巨噬细胞能明显增强胃癌细胞增殖能力。