观察特应性皮炎(AD)患者外周血T淋巴细胞中Rho激酶活化情况,分析其临床意义。
方法收集60例AD患者和60例健康儿童外周肝素抗凝血8 ml,分离提取T细胞和血清。分别用AD血清和健康对照血清培养AD患者T细胞或健康对照T细胞,分为患者T细胞+自身血清组、患者T细胞+健康对照血清组、健康对照T细胞+自身血清组、健康对照T细胞+ AD血清组。此外,分别用Rho激酶特异性抑制剂Y27632 (Y27632组)、CD3/CD28单抗(CD3/CD28单抗组)、Y27632 + CD3/CD28单抗(Y27632 + CD3/CD28单抗组)处理AD患者T细胞,自身血清培养AD患者T细胞为患者T细胞组。采用Western印迹法检测各组Rho激酶活性,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测T细胞增殖活性,ELISA检测白细胞介素(IL) 6、IL-10水平。
结果新鲜分离的AD患者外周血T细胞Rho激酶活性(2.47% ± 0.89%)显著高于健康对照组(0.65% ± 0.35%,t= 2.729, P< 0.05)。AD患者T细胞在体外经10%胎牛血清培养24 h后Rho激酶活性(0.70% ± 0.38%)较培养前显著降低(t= 2.658, P< 0.05),但与培养24 h后健康对照T细胞(0.63% ± 0.32%)相比,差异无统计学意义(t= 1.010, P> 0.05)。与健康对照血清培养T细胞相比,AD血清培养T细胞会增加Rho激酶活性(F= 8.22, P< 0.001),患者T细胞+自身血清培养24 h后Rho激酶活性(2.41% ± 0.87%)明显高于患者T细胞+健康对照血清组(0.76% ± 0.41%),健康对照T细胞+ AD血清组(2.17% ± 0.85%)显著高于健康对照T细胞+自身血清组(0.64% ± 0.33%),差异均有统计学意义(P< 0.05)。Y27632可显著抑制AD患者T细胞的增殖和IL-6的分泌(F= 18.68、22.95 ,P< 0.001),Y27632组T细胞增殖率、IL-6的表达均显著低于患者T细胞组(均P< 0.05),且Y27632 + CD3/CD28单抗组也显著低于CD3/CD28单抗组(均P< 0.05),而Y27632对AD患者T细胞IL-10分泌无显著影响。
结论AD患者T淋巴细胞存在Rho激酶信号活化异常,提示Rho激酶信号异常在AD发病过程中可能发挥着一定的作用。