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目的
探索ppk1基因对尿路致病性大肠埃希菌抗氧化能力的影响及其机制。
方法以尿路致病性大肠埃希菌CFT073为研究对象,构建敲除株△pk1和回补株△pk1-C。比较过氧化氢刺激野生株、敲除株和回补株后各个时间点的生长率,比较两菌株抗氧化能力的差异;提取野生株和敲除株菌体蛋白进行双向电泳及质谱分析,探究CFT073 ppk1基因缺失后蛋白表达的差异;通过荧光定量RT-PCR技术进一步验证过氧化氢酶编码基因katG和katE的表达变化。
结果△pk1在各个刺激时间点的生存率均比野生株的低,而ppk1基因回补株各时间点的生存率与野生株基本一致;双向电泳后的蛋白质图谱经ImageMaster软件分析选取了表达差异点进行质谱分析,经MASCOT数据库鉴定,获得敲除株相对于野生株6个表达下调的蛋白和1个表达上调的蛋白;敲除株katG和katE的表达水平分别是野生株的(20.5±8.2)%和(20.9±6.9)% (P<0.01)。
结论ppk1可能通过调控katG和katE基因的表达参与尿路致病性大肠埃希菌对氧化压力的适应。