【摘 要】
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目的 观察硫化氢对肝窦内皮细胞(SEC)凋亡的影响.方法 利用胶原酶灌注、Percoll密度梯度离心、选择性贴壁培养去除Kupffer细胞方法分离SEC.原代培养SEC分成为正常对照组、过氧化氢诱导组、硫氢酸钠预处理+过氧化氢组、PPG处理组和PPG预处理+过氧化氢组,各组培养24h再行实验研究.经相应的过氧化氢(200 μmol/L)、硫氢酸钠(200 μmol/L)、PPG(2 mmol/L)
【机 构】
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214005无锡市传染病医院脂肪肝科,252000山东省聊城市人民医院感染科,310014浙江中医药大学附属杭州市第六人民医院杭州市西溪医院内四科,310014浙江中医药大学附属杭州市第六人民医院杭州
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目的 观察硫化氢对肝窦内皮细胞(SEC)凋亡的影响.方法 利用胶原酶灌注、Percoll密度梯度离心、选择性贴壁培养去除Kupffer细胞方法分离SEC.原代培养SEC分成为正常对照组、过氧化氢诱导组、硫氢酸钠预处理+过氧化氢组、PPG处理组和PPG预处理+过氧化氢组,各组培养24h再行实验研究.经相应的过氧化氢(200 μmol/L)、硫氢酸钠(200 μmol/L)、PPG(2 mmol/L)处理后,应用流式细胞仪检查各组细胞凋亡、线粒体跨膜电压及easpase-3活化情况.结果 SEC在过氧化氢诱导下,细胞线粒体跨膜电压降低,细胞荧光强度增加(t =5.56,P <0.01),caspase-3活化,细胞发生凋亡,并以早期凋亡较为明显(t=4.68、7 26,P<0.01);硫氢酸钠预处理后,过氧化氢诱导作用降低,细胞荧光强度降低(t=4.391,P<0.01),caspase-3活化程度降低,细胞凋亡显著减少(t=3.776、5 626,P<0.01);应用PPG抑制内源性硫化氢产生后,caspase-3轻度活化,SEC凋亡增加,且以早期凋亡增加为主(t=5.109,P<0.01);加过氧化氢诱导后,细胞线粒体跨膜电压减少,细胞内荧光强度显著增加(t=10.635,P<0.01),caspase-3活化程度增强,SEC的早、晚期凋亡率均显著增加(t=8.036、9.112,P<0.01).结论 硫化氢可能通过抑制肝窦内皮细胞的线粒体跨膜电压变化,进而抑制caspase-3的活化而抑制肝窦细胞凋亡。
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