正交设计优化大白菜ISSR-PCR反应体系

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以大白菜为试材,采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取大白菜基因组DNA,采用正交实验设计方法,对dNTPs、Mg2+、TaqDNA聚合酶、引物、及模板DNA五因素四水平进行优化,筛选并建立了适合大白菜的ISSR—PCR反应体系。结果表明:25μL的反应体系中含有1.5mmol/L Mg^2+、200μmol/LdNTP、0.5UTaqDNA聚合酶、0.7μmol/L引物、30ng模板DNA。在此基础上探讨了最佳循环次数,应用该优化反应体系,用3个不同循环数对资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优
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