四川泡菜中植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因克隆与表达

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目的:对植物乳杆菌中亚硝酸盐还原酶基因进行克隆并表达,并测定酶的活力。方法:根据GenBank中亚硝酸盐还原酶(NIR)基因序列,设计引物。提取植物乳杆菌的DNA,采用PCR技术扩增nir基因,TA克隆构建获得重组质粒pMD19-nir,分析其核苷酸序列同源性。通过双酶切连接到表达载体pET-32a(+)中,获得重组表达载体pET-32a-nir,构建成功后转化到E.coli BL(DE3)中进行表达研究。经IPTG诱导表达,得重组蛋白,超声波破碎,提取粗酶液,测定酶活力。结果:克隆的目的基因序列长度为1
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