【摘 要】
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谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院,代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室（天津科技大学）,教育部工业发酵微生物重点实验室（天津科技大学）,天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心
【基金项目】
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国家重点研发计划(2018YFA0900304);工业微生物优良菌种选育与发酵技术公共服务平台项目(17PTGCCX00190)
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谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率。首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率。实验结果显示:在启动子Ptuf和RecT的双重作用下,采用滞后链(70bp、12.5μg)优化组合方式,使基因编辑效率提升至
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