氯化消毒对细菌抗生素抗性质粒及其所携抗性基因的转移及破坏机制研究

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目的

研究氯化消毒在不同环境条件下对抗生素抗性细菌大肠埃希菌(E. coli)HB101(pUC19质粒)的灭活规律以及对其抗生素抗性基因的转移和破坏机制。

方法

E. coli菌株与0.5、0.75、1.00、0.55 mg/L次氯酸钠作用后,分别在0.25、1、2、5、10、20、30 min的处理时间进行余氯测定、菌落计数,并采用消毒一级动力学模型和灭活动力学EFH模型进行拟合,获得E. coli的灭活曲线,同时,采用PCR技术进行抗生素抗性质粒pUC19质粒及其氨苄青霉素抗性基因(ampr)的检测,利用细菌转化试验评价抗生素抗性质粒的功能,计算达到不同的细胞杀灭对数值时的Ct值(t时刻的余氯浓度)。

结果

消毒温度和pH值对水中E. coli的杀灭、pUC19质粒和ampr的破坏具有显著影响,当消毒温度为4、20、36 ℃时,细胞消灭对数值达到5时所需Ct值分别为11.92、10.28、7.67 min·mg/L。同时,当消毒pH分别为6.0、7.2、8.0,氯浓度分别为0.75、0.70、0.55 mg/L时,细胞消灭对数值达到5时所需Ct值分别为6.68、10.28、15.73 min·mg/L。pH 7.2且消毒温度为4、20、36 ℃,氯浓度分别为9、5、3 mg/L时,为完全破坏细胞外游离抗生素抗性质粒的转化功能,消毒所需Ct值分别为36.11、34.17、16.09 min·mg/L。次氯酸钠消毒会导致游离ampr基因甚至具有转化功能的完整质粒pUC19质粒释放,并污染水体,只有当Ct值达到903.03 min·mg/L之后,完整的ampr基因才能被消除,远远超过细菌致死Ct值。

结论

次氯酸钠消毒过程中,抗生素抗性细菌E. coli全部被破坏,但其携带抗生素抗性的DNA片段(质粒和基因)仍可能保持完整性且具有转化功能。

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