分析河北卢龙县腹泻儿童粪便标本中存在的诺如病毒株NHBGR59的全基因组序列,了解其基因结构特点和进化特征。
方法根据454高通量测序获得的两个重叠群(contig)和诺如病毒参考株序列(GenBank登录号KM198534)设计NHBGR59特异性引物,用重叠反转录聚合酶链反应(Reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增的技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)的方法扩增其全长基因,经过分子克隆、测序获得全基因组序列,然后进行三个开放阅读框(Open Reading Frames,ORFs)序列和系统进化树的分析。
结果诺如病毒河北卢龙珠HBGR59病毒全基因组全长为7 563 bp(除了PolyA尾),病毒基因组分为三个ORFs:ORF1(5~5 098 nt)、ORF2(5 079~6 731 nt)和ORF3(6 731~7 510 nt),其中ORF1和ORF2之间有20 bp重叠,ORF2和ORF3之间有1 bp重叠。经过全基因组序列分析发现其和基因组II基因型6(genogroup II GenotypeVI, GII.6)诺如病毒株30443同源性最高(同源性为98.0%)。ORF2以及ORF3核苷酸和氨基酸序列与株30443同源性最高(分别为97.0%,98.0%;99.0%,98.0%)。ORF1的基因和氨基酸序列与台湾暴发的急性胃肠炎GII.6株11-FJ-5(GenBank号KM461694)同源性最高(99.0%,99.3%),只在高突变P2区发生一个氨基酸突变位点:aa308D→N;其中衣壳区的氨基酸序列与其他GII.6型诺如病毒相似度为73.0%~99.3%。进化树分析发现河北卢龙株HBGR59与GII.6型株30443和11-FJ-5亲缘关系最近。
结论河北卢龙株HBGR59为诺如病毒GII.6型,进化关系上与已报道的GII.6型株30443和11-FJ-5最近。