人PAK1重组蛋白质的表达及在人胃癌BGC-823细胞内定位

来源 :细胞生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：leonoox

【摘要】

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为检测人PAK1在原核细胞中的表达情况及在真核细胞中的定位，利用RT—PCR技术获得PAK1目的基因，构建GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5x-1／PAK1，IPTG诱导后进行SDSPAGE及Western印迹

【作者】

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王桂玲周颖赵大林李家滨刘芙蓉李丰

【机构】

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中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室,沈阳体育学院生理学教研室

【出处】

：

细胞生物学杂志

【发表日期】

：

2007年1期

【关键词】

：

PAK1 基因克隆蛋白表达转染绿色荧光蛋白 p21-activated kinasel gene clone protein expression

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为检测人PAK1在原核细胞中的表达情况及在真核细胞中的定位，利用RT—PCR技术获得PAK1目的基因，构建GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5x-1／PAK1，IPTG诱导后进行SDSPAGE及Western印迹检测，并用体外激酶实验测定其生物学活性；同时，构建带绿色荧光蛋白（GFP）标签的真核表达载体pEGFP／PAK1，利用脂质体法转入人胃癌BGC-823细胞系中。在共焦激光扫描显微镜下观察癌细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果表明，pGEX-SX-1／PAK1载体能在大肠杆菌BL-21中正确表达GST-

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