大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞的分离与表型鉴定

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fenglilong_liumang
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目的 探讨阴茎海绵体中肌源性干细胞(MDSCs)的分离与表型鉴定的方法.方法 取2个月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,用0.5%Ⅰ型胶原酶、0.1%胰蛋白酶进行酶消化初步分离.应用改良的Preplate差速贴壁法进一步行细胞纯化,细胞培养1h,贴壁细胞为PP1;未贴壁细胞转瓶培养2h,贴壁细胞为PP2;未贴壁细胞再次转瓶培养18h,贴壁细胞为PP3;此后,每次间隔24h转瓶培养依次获得的贴壁细胞为PP4、PP5、PP6,观察细胞形态变化.流式细胞仪检测PP3、PP6细胞中干细胞抗原l (Sca-l)和结蛋白(Desmin)的阳性表达量;Western blot检测PP1 ~ PP6细胞中Sca-1和Desmin的阳性表达;免疫荧光细胞化学法检测Sca-1、Desmin、Sca-1/Desmin在PP6细胞中的表达.结果 PP1~ PP6细胞贴壁能力逐渐减慢,PP6细胞贴壁最慢,2~3d后才开始贴壁成圆形或短梭形.流式细胞仪检测结果显示,PP3细胞中Sca-1阳性表达量为(0.3±0.2)%,与同型对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),Desmin阳性表达量为(15.3±1.5)%,与同型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);PP6细胞中Sca-1、Desmin阳性表达量分别为(5.7±0.7)%、(41.1±1.6)%,与PP3比较差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot显示PP1 ~ PP5细胞中未检测到Sca-1蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到Sca-1蛋白的表达,Desmin蛋白在PP1 ~ PP6细胞中表达逐渐增强.免疫荧光细胞化学显示在PP6细胞中有少量细胞表达Sca-1、散在分布、以胞质表达为主;表达Desmin细胞聚集、数量较多、主要表达于胞质;亦发现有极少量双阳性标记细胞(Sca-1/Desmin),共同表达于同一细胞的胞质.结论 在大鼠阴茎海绵体中分离出既有于细胞表型又有肌源性表型的细胞,提示此类细胞为MDSCs.
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